尼古丁对T淋巴细胞分化的影响

发布时间：2020-05-18 20:05

【摘要】：目的: 观察尼古丁对T淋巴细胞亚群CD4+细胞和CD8+细胞分化的影响，以及对CD4+细胞中Th1、Th2细胞分化的影响，为尼古丁对免疫系统的作用提供进一步的证据。方法:（1）20只6－8周的BALB/C雌性小鼠随机分为4组：对照组、1.5mg组、3.0 mg组和6.0 mg组。对照组小鼠腹部皮下注射生理盐水溶液，另三组分别按1.5mg/kg，3.0 mg/kg ，6.0 mg/kg注射尼古丁溶液，均连续注射3周；无菌取小鼠脾脏，不锈钢网制备脾细胞溶液，尼龙棉柱法分离T淋巴细胞；分别加入Thy-1-FITC抗体，CD4-FITC抗体和CD8-PE抗体，流式细胞仪检测并分析T细胞的分离率及CD4+细胞与CD8+细胞的比值；（2）使用Mouse Th1/Th2 Cytokine CBA试剂盒检测血浆样品中5种细胞因子IL-2、IL-4、IL-5、IFN-γ和TNF-α的浓度。（3）抽提T淋巴细胞总RNA，设计以上五种细胞因子的特异引物，RT-PCR法扩增特异片段，琼脂糖凝胶电泳并照相，凝胶分析系统分析结果。结果:（1）T淋巴细胞的分离率在78.53％－83.66％之间，即应用尼龙棉柱法分离T淋巴细胞可达到80％左右的分离率；对T淋巴细胞中CD4/CD8比例的测定结果显示，3个浓度组和对照组相比均有显著性差异，P0.05，说明尼古丁影响T淋巴细胞CD4+和CD8+亚群的分化，使CD4/CD8比例降低，而且，高浓度尼古丁的作用更加显著。（2）经不同浓度尼古丁处理后，血浆中五种细胞因子的含量发生明显改变：IL-2和TNF-α浓度增加，，IL-4和IL-5浓度降低。IFN-γ没有检测到。（3）RT-PCR结果显示，经不同浓度尼古丁处理后，T细胞内五种细胞因子的基因表达均受到不同程度的影响，IL-4、IL-5和TNF-α的基因表达下降，IL-2和IFN-γ基因表达增高。结论:小鼠经尼古丁处理后，CD4+细胞与CD8+细胞的比值下降，Th2细胞因子（IL-4、IL-5）的表达下降，Th1细胞因子(IL-2、IFN-γ)表达有增高趋势。因此，尼古丁可能影响T淋巴细胞CD4+和CD8+亚群的分化，使CD4/CD8比例降低；可能影响Th1,Th2细胞的平衡，主要是抑制Th2细胞，进而抑制体液免疫应答。
【图文】：

抗体,尼古丁,不锈钢网,对照组

结果 T 淋巴细胞的分离率只 6-8 周的 BALB/C 雌性小鼠随机分为 4 组：对照组、1、6.0 mg 组。实验组每组每天分别按 1.5mg/kg，3.0 mg/kg，注射尼古丁溶液；对照组小鼠每天腹部皮下注射生理盐 3 周；无菌取出小鼠脾脏,不锈钢网制备单个脾脏细胞悬裂解红细胞后，尼龙棉柱法分离 T 淋巴细胞。细胞计数胞数<1×106个/ml，加入 Thy-1 抗体，4℃避光孵育 30 分T 淋巴细胞表面的特异性分子，利用 Thy-1 抗体只与 T 淋的原理，流式细胞仪检测 Thy-1 抗体发出的绿色荧光，用数据获取和分析，每份样本获取 10000 个细胞,即可计算个细胞溶液中细胞的比率，即 T 淋巴细胞分离率，见图

散点图,T淋巴细胞,淋巴细胞,散点图

即可计算出各门内的细胞数量，M2 门内的细胞数与总细胞数的比值即为 T 淋巴细胞的分离率。每个样本均获取三次数据，分别统计后计算平均值。对所有样本进行同样的分析，发现 T 淋巴细胞的分离率在 78.53％－83.66％之间。因此，应用尼龙棉柱法分离 T 淋巴细胞可以达到 80％左右的分离率。2. T 淋巴细胞中 CD4/CD8 比例尼龙棉柱法分离 T 淋巴细胞，细胞计数后进行稀释，使细胞数<1×10个/ml。在 T 淋巴细胞中加入 CD4-FITC 和 CD8-PE 抗体，4℃避光孵育 3分钟，用流式细胞仪对 CD4+细胞数和 CD8+细胞数进行检测，用 Cell Que软件进行数据获取和分析，每份样本获取 10000 个细胞。图 3－2 为细胞获取和分析的散点图。
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2004
【分类号】：R392

【参考文献】