去势大鼠胫骨形态计量学改变及骨髓基质细胞IL-1、IL-6、TNF-α、TGF-βmRNA的表达

发布时间：2020-05-20 19:59

【摘要】：目的 本文通过建立骨质疏松模型，观察去势后随时间的延长，大鼠胫骨形态计量学改变，体外培养的骨髓基质细胞(BMSCs)IL-1，IL-6，TGF-β，TNF-α mRNA表达以及上清液中IL-1β和NO浓度改变，探讨以下问题： (1)雌激素缺乏对原发性骨质疏松的影响，骨质疏松发病过程中，骨吸收参数与骨形成参数的变化 (2)体外培养的BMSCs能否表达IL-1，IL-6，TGF-β和TNF-α mRNA (3)绝经年限对BMSCs IL-1，IL-6，TGF-β和TNF-α mRNA表达的影响 (4)NO浓度改变与骨质疏松之间的关系 方法 将56只4月龄雌性Wistar大鼠随机分为6组：假切1月组(Ⅰ组)，假切4月组(Ⅱ组)；去势1月组(Ⅲ组)，去势4月组(Ⅳ组)，去势7月组(Ⅴ组)，去势12月组(Ⅵ组)，每组8只。各组大鼠分别于实验末断颈处死，取左侧胫骨，新鲜分离骨髓细胞，静置贴壁法体外培养BMSCs 13天后，吸取上清液。采用原位杂交(ISH)方法分析IL-1，IL-6，TGF-β和TNF-α在去势大鼠不同时期BMSCs表达情况；酶联免疫吸附(ELISH)法测定上清液中IL-1β浓度；NO浓度含量检测采用硝酸还原酶法。取右侧胫骨制备不脱钙的骨切片，甲苯胺蓝染色后，行骨组织形态计量学观察。 结果 (1)去势后随时间的延长，大鼠胫骨骨小梁体积逐渐减少。与假切1月组相比，在去势1、4、7、12月后小梁骨占骨髓腔的体积百分比(BV／TV％)分别减少3.13％(P＞0.05)，24.11％(P＜0.05)，42.73％(P＜0.01)，64.93％(P＜0.01)；初级骨小梁占骨髓腔的体积百分比(PBV／TV％)分别减少3.73％(P＞0.05)，20.12％(P＜0.01)，60.78％(P＜0.01)，74.04％(P＜0.01) (2)去势后各组大鼠成骨参数降低。与假切1月组相比，在去势1、4、7、12月后类骨质占骨髓腔的体积百分比(OV／BV％)分别减少7.02％(P＞ 天津市自然科学基金项目NO 003606711天津医科大学硕士研究生论文 0.05)，66.67%(P0.01)，57.89%(P(0.01)，8070%(P(0.01):类骨质 占骨小梁的体积百分比(Ov叮BV%)分别减少2.550，0(P0.05)，61620;0(P 0.01)，39.85%(p0.05)，32.84%(p.05);成骨细胞表面(Ob.S忍S%) 分别减少35.39%，，58.67%，49.25%，31.97%，且均有统计学意义(P0.01); 类骨质表面(05忍50，0)分别减少30.450，0(P0.05)，65.000，0(P0.02)，36.420，0 (P0.05)，91.84%(P0.01)。去势4月组与假切4月组各成骨指数改变 无统计学意义 (3)与假切组相比，去势组破骨细胞数和吸收表面等骨吸收参数增加 (4)体外培养的BMSCs可大致分为梭形和扁圆型两种类型，IL一1、IL一6、 TGF一p和TNF一Q mRNA在这两种细胞的原位杂交中均呈阳性表达:去势 后，IL一1、几一6和TN下一a mRNA在扁圆型细胞的表达增强，并随时间的延 长有升高趋势，而TGF一p mRNA的表达则相反 (5)与假切组相比，去势后BMSCs上清液中IL-lp浓度降低，与假切1 月组相比，假切4月大鼠BMSCs上清液中IL一lp浓度亦降低 (6)去势后，BMSCs上清液中NO浓度含量下降，而去势1、4、7和12月 组NO浓度改变无统计学意义 结论: (l)去势后随时间的延长，大鼠骨质丢失的比例和数量越来越严重，由雌 激素缺乏引起的骨质疏松的发病过程中，破骨细胞数、吸收表面等骨的吸收 参数增加，但类骨质表面、成骨细胞表面等成骨参数降低，引起骨的形成与 吸收脱偶联而导致骨质疏松的发生 (2)IL一1，几·6，TGF一p和TNF·a mRNA均能在体外培养的BMSCs胞 浆中表达;去势后机体BMSCs表达IL一1，IL一6和TNF一Q能力增强，并随 去势后时间的延长有增高趋势，而表达TGF一p的情况却相反 (3)雌激素缺乏后，BMSCs合成和分泌NO功能显著降低，NO作为一种 信使分子，在低浓度情况下能增强骨质的吸收，而导致骨质疏松的发生
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2004
【分类号】：R361

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本文编号：2673122