高压氧对急性移植物抗宿主病小鼠细胞因子基因表达的影响

发布时间：2020-05-26 17:49

【摘要】： 急性移植物抗宿主病(aGVHD)是异基因骨髓移植的主要并发症，严重影响患者的生存率。目前常用的免疫抑制疗法如CsA+MTX毒副作用大，易引起严重感染及肝肾中毒。而单克隆抗体虽可抑制免疫排斥，但因降低移植物抗白血病(GVL)效应而易导致骨髓移植失败。因此，寻找一种新的毒副作用小且较温和的免疫抑制方法成为当今急需解决的课题之一。 研究表明高压氧(hyperbaric oxide，HBO)作为一种温和的免疫抑制方法既能抑制aGVHD又保留GVL效应，它可抑制细胞免疫功能，降低T淋巴细胞及其亚群数量，抑制IL-2的产生及其受体的表达，使T细胞对其反应性下降；抑制T细胞表面粘附分子LFA-1的表达，从而抑制T细胞活化及其对靶细胞的杀伤作用。它可延长异基因移植皮片存活时间，还可改善组织供氧，抗感染，增加受损组织血流量，所以对aGVHD的防治有明显优势。本文的目的在于，在以往实验的基础上，观察异基因骨髓移植小鼠，经HBO，CsA+MTX作用后，细胞中促进aGVHD的细胞因子IL-2，TNF-α及抑制aGVHD的细胞因子IL-4，IL-10的mRNA表达情况，探讨HBO抗aGVHD的机理，为HBO的临床应用提供实验依据。 方法 一、动物模型复制 供鼠BALA／C(H-2~d)雌性，受鼠C57BL／6(H-2~b)雄性(由中国医科大学动物部提供)，8-12周龄，体重20g左右。受鼠 C57BL/6在骨髓移植前24小时内在直线加速器内接受18O0cGY 全身照射，剂量率为ZooeGY/min。骨髓移植当天颈椎脱臼法处 死供鼠，在0℃下无菌取脾及骨髓，制成混合细胞悬液，经尾静脉 输给受鼠。 二、实验动物分组与处理 受鼠受照射后随即分成五组，A组:同基因移植组;B组:异基 因移植组;C组:csA+MTX组;D组:供鼠高压氧处理组;E组: 供、受鼠高压氧处理组。D组及E组供鼠于骨髓移植前3天起，连 续3天，每日一次，送人直径48cm，深48cm的试验用高压氧舱 中，用99 .2%的氧气冲洗该舱3次后，30分钟内使舱内压力达0. 25 MPa，并维持该压力1 .5小时，减压30分钟后取出。E组受鼠于 骨髓移植后第一天起至第十天送人高压氧舱中，条件同上。C组 受鼠骨髓移植后10天内，每日腹腔注射CsA(2.sm扩kg·d)，移 植后第1、3、5、9天腹腔同时注射M以(7m扩m，)。各组受鼠骨髓 移植后送人无菌室内饲养。 三、细胞因子基因表达的检测 骨髓移植第11天处死各组受鼠，取出脾组织，提取总RNA， 用RT一PCR法检测细胞因子IL一2，TNF一a，IL一4，IL- 1 omRNA水平的变化，所得数据用配对T检验进行统计学分析。 结果 一、一般状态 骨髓移植以后观察受鼠一般状态，两组经HBO处理小鼠及同 基因移植组一般状态较好，毛色光泽，活泼，食欲好，脱毛，弓背等 aGvHD症状不明显。异基因移植组(B组)小鼠一般状态差、倦 怠、食欲不振、脱毛，弓背等aGVHD症状明显。csA+M双组(C 组)小鼠一般状态不好，脱毛，弓背等aGVHD症状不明显，但有腹 泻现象发生。 二、移植后n天各组小鼠生存率比较 HBO组(D组:9/l1;E组:9/10)及同基因移植组(A组:9/ 10)生存率明显高于异基因移植组(B组:8/17)及CsA+MTX组 (C组:9/l9)。A、D、E三组之间比较，生存率无明显差别。B、C 两组之间生存率无明显差别。 三、CsA+M仪组TNF一a及IL一2的mRNA相对含量显著 低于异基因组(p0.05)，而IL一4和IL一10的mRNA相对含量 则与异基因组无明显差别(p0.05)。D组及E组TNF一。和IL 一2的mRNA相对含量显著低于异基因组(p0 .05)，而又显著 高于CsA+MTX组;IL一4和IL一10的mRNA相对含量显著高于 异基因组及CsA+MTX组(p0.05)。E组，I’NF一amRNA相对 含量显著低于D组(p 0.05)，IL一2、IL一4和IL一10的mRNA 在两组之间变化不明显(p0.05)。 讨论 aGvHD发病机制尚未完全明了，一般认为主要和次要组织相 容性抗原复合物的差异，是移植排斥的分子基础。移植物中的成 熟T细胞是导致aGvHD的免疫活性细胞。“细胞因子风暴学说” 指出，分泌失调的细胞因子是引起aGVHD时组织损伤的主要介 质。Thl细胞分泌的细胞因子IL一2，TNF一a促进aGVHD的发 生，ThZ细胞分泌的细胞因子几一4，IL一10则抑制aGVHD的发 生。aGVHD时靶器官损害的共同通路被认为是细胞因子网络的 破坏。本实验研究结果证明: 1.HBO可明显抑制aGVHD，提高aGVHD小鼠的生存率。 2.HBO抑制aGVHD的机制是通过减少TNF一amRNA及IL 一ZmRNA的形成，.导致促进aGVHD的发生的细胞因子IL一2， TNF一a在血液中浓度降低;同时增加抑制aGvHD发生的细胞因 子IL一4及IL一10的mRNA的量，使IL一4及IL一10在血液中浓 度升高。 3.HBO的毒副作用小，具有温和的抗aGVHD的作用，与 CsA 十MTX相比，可明显提高小鼠的生存率，所以比CsA+M以更适 用于临床应用。
【学位授予单位】：中国医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2003
【分类号】：R392

【参考文献】

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本文编号：2682193