腺伴随病毒-2型载体的构建外源基因的表达及重组病毒包装系统研究

发布时间：2020-06-01 07:24

【摘要】：在本实验中，我们以野生型人类2型腺伴随病毒(Adeno-associated Virus Type 2，，AAV-2)全基因组载体pSSV9，pSSV9-int~-为基础，构建了AAV-2重组病毒载体pSSV9／P40-LacZ(+)，pSSV9／P40-LacZ(-)，pSSV9／MuLV-neosv和pSSV9／MuLV-neosv-IL2，以及表达载体pGEM-3zf／P40-LacZ。用重组载体质粒转染宿主细胞，以及重组病毒转导宿主细胞后，作了外源基因瞬式表达研究，探讨了该载体外源基因表达规律。对载体质粒转染和重组病毒感染的细胞进行了初步形态学观察研究，考察了该重组病毒载体在使用中的安全性。此外，我们以EBV载体pBV101为基础，构建了pBV101／AAVitr~-，表达载体，并初步建立了EBV载体重组AAV包装细胞系统。 1、重组AAV载体的构建 我们以pSSV9(pSSV9-int~-)AAV-2基因组为载体的基础，从两个Xba Ⅰ切去AAV的rep和Cap基因，替换以外源基因及其转录控制元件。插入AAVP40启动子和β-半乳糖苷酶基因LacZ(含SV40小T抗原及poly信号)，形成pSSV9／P40-LacZ(+)和pSSV9／P40-LacZ(-)载体。并在克隆过
【图文】：

PSSVg沪40一LaZ(c+)与PSSVgPf4o一LaZc(一)

用pSSVgP/40一Lacz‘)转染后表达p半乳糖昔酶的A549细胞
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：1996
【分类号】：R346

【共引文献】

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本文编号：2691147