凋亡抑制因子Svv基因的构建及其原核表达

发布时间：2020-06-13 09:58

【摘要】：目的：构建含有凋亡抑制因子Svv基因的原核表达载体，并转化大肠杆菌，，诱导表达出目的蛋白后，用原核表达产物作为抗原制备单抗。 方法：(1)以RT-PCR方法扩增目的基因，扩增产物纯化后克隆至测序载体pGEM-T-easy，挑取阳性克隆经鉴定后测序。将测序正确的目的基因Svv克隆至pRSET-c表达载体的多克隆位点间，构建含有目的基因的表达载体，pRSET-c-Svv。(2)利用基因工程技术，用重组质粒pRSET-c-Svv转化大肠杆菌BL21，经IPTG诱导后，表达目的蛋白。(3)将纯化后的目的蛋白制备成抗原，免疫Balb／c小鼠，取小鼠脾细胞与Sp2／0小鼠骨髓瘤细胞进行细胞融合，建立杂交瘤细胞系，采用ELISA检测上清中抗体蛋白的分泌表达。 结果：(1)经测序，限制性酶切分析及PCR方法鉴定，目的基因被插入表达载体中，成功构建原核表达载体。(2)经SDS-PAGE鉴定，转化后的大肠杆菌，高效表达目的基因蛋白。(3)融合后的杂交瘤细胞，经间接ELISA法鉴定，获得的4个阳性反应孔。至此，初步制备Svv蛋白的 第四军医大学硕士学位论文 单抗。杂交瘤细胞的克隆化培养及单抗的全面鉴定，还将继续进行。 结论:抗凋亡因子S。的成功克隆、原核表达蛋白的获得及其单克 隆抗体的制备，为S。蛋白的细胞凋亡调控功能、在肿瘤细胞选择性表 达机理等的深入研究提供了部分实验基础，也为肿瘤的荃因治疗提供了新 思路。尤其是单克隆抗体的成功制备，在肿瘤诊断和治疗方面将有一定潜 在的临床应用价值。
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2004
【分类号】：R346

【共引文献】

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本文编号：2711004