亚低温对大鼠全身炎症反应综合征影响的实验研究

发布时间：2020-06-22 05:48

【摘要】： 前言多脏器功能障碍综合征(multiple organ dysfunction syndrome, MODS)是危重患者主要死亡原因之一，其机制不甚明确。目前普遍认为全身炎症反应综合征(systemic inflammatory response syndrome, SIRS)可能是MODS最主要的病理学基础和根本原因。SIRS发生时，启动或活化体内各种活性细胞、补体系统、凝血和纤溶系统，释放多种炎症介质，在体内相互作用呈失控状态，并逐级放大，加重组织、器官的进一步损害，最终发展至MODS。现代医学对MODS的发生机制的认识虽然有了长足的进步，治疗方面尤其是针对炎症介质的过度释放和造成炎症介质的原因采取了如抗内毒素的单克隆和多克隆抗体、抗细胞因子与继发性介质生物调节物等许多新方法，提出抗生素、抗内毒素、抗炎症介质的三抗疗法。诸多方法取得一定成果，但迄今尚无一种通过Ⅲ期临床试验，MODS的病死率仍高达70％左右。目前迫切需要一种能有效抑制炎症反应，并对脏器损害起保护作用且无明显副作用的方法。亚低温对急性脑损伤、脑复苏及器官移植的脏器保护作用已被证实。本实验主要通过测定亚低温情况下SIRS动物模型血清酶及细胞超微结构变化，肺组织TNF-αmRNA及肝组织腺苷酸及乳酸的含量改变，对亚低温能否减轻炎症反应和SIRS动物模型损伤以及能否推广至SIRS和MODS的防治做初步探讨，从而阻止或延缓多器官功能障碍综合征的发生，为临床防治SIRS和MODS提出治疗新途径。材料与方法 l、动物模型 60只Wistar大鼠予3％戊巴比妥40mg／kg腹腔注射麻醉生效后，随机分为正常对照组＼内毒素组和亚低温组。内毒素组和亚低温组腹腔注射内毒素K0mg／kg）制成大鼠SIRS的动物模型。正常对照组腹腔注射等量生理盐水。亚低温组注射内毒素后立即给予亚低温干预，向动物全身喷洒凉水KtX将多导生理记录仪肛温探针插人大鼠直肠中持续监测肛温，再通过调节室温，辅以电热毯和加热灯，监测亚低温组动物肛温维持于32－33℃之间。 2、标本采集和处理各组于实验1上和3小时各取6只动物于无菌条件下取材，肺组织置于去RNA酶的EPPendorf管中－80t冻存，待测TNF－a InRNA。实验3小时各组取8只动物剖开腹腔肝组织取材液氮中保存，待测腺耷酸及乳酸的含量。于剖腹前球后V丛取血IInl，分离血清冻存，待测血清酶。同时留取肺及肝组织置于2．5％戊二醛及二甲砷酸缓冲液中固定，进行透射电镜观察。 3、实验方法门）应用逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）方法研究TNF－a 在SIRS大鼠肺组织分子水平的表达：用TRIZOL总yA提取试剂提取肺组织tllnry A，反转录合成O＊A的第一链，再经凝胶电泳成像及分析系统扫描PCR扩增产物，以p－action内参照标化 TNF一。含量。 p）利用全自动生化分析仪生化方法检测血清酶ALTJST、 ASP＊DH＊K各项指标的变化。 O）各组大鼠肝组织标本分别称重后加人 0．srnL的 10％高氯酸中，在冰浴下间断超声匀浆高压液相色谱法测定各组大鼠肝’ ·2· 组织ATP、ADP、AMP含量变化。 K）严格按乳酸测试盒说明书生化方法测定肝组织乳酸含量变化，匀浆液中蛋白测定采用考马斯亮兰法。 O）于日立H－600透射电镜下观察各组动物肺组织、肝组织细胞超微结构的形态改变。 4、统计学分析：所得数据以均值土标准差沁幻）表示，采用 SAS统计软件处理，样本均数比较采用 Dunnett t检验。结果 l、内毒素组及亚低温组血清酶各项数值（除碱性磷酸酶）均较正常对照组明显升高帅＜0．01，p＜0．05人且内毒素组各项指标明显高于亚低温组h＜0．01八人正常对照组肺组织及肝组织细胞超微结构形态正常。亚低温组细胞超微结构改变轻微，内毒素组病理改变明显。 3、内毒素组比正常对照组肝组织ATP人DP含量显著减少（P ＜0．01），AMP含量明显减少（p＜0．05）；亚低温组 ATP、ADP含量比正常对照组有减少趋势，但无统计学差异性帅＞0．05厂与内毒素组相比，亚低温组 ATP、ADP含量明显高于内毒素组（p＜0． 05）。 4、内毒素组比正常对照组乳酸含量明显增加帅＜0．05厂亚低温组比正常对照组乳酸含量有增加趋势，但无统计学差异h＞ 0．05人亚低温组乳酸含量明显低于内毒素组h＜0．05八 5、正常对照组有少量TNF－a mRNA表达。内毒素组与亚低温组均较正常对照组各时点表达增强帅＜0．05人内毒素组比亚低温组表达明显增强h＜0．05X尤以 for显著h＜0．01入并于 Zlir达到高峰，约为正常对照组的二．8倍，3hr有减低趋势，但无统计学差异（p＞0．05）。 ·3· 讨论 SIRS是指机体对各种严重刺激或打击引起的全身失控性炎症免疫反应，最终序贯发展至 MODS。Tisherman等发现用亚低温方法治疗创伤低灌注患者时具有保护细胞和减少继发性炎症反应和多脏器衰竭的可能，能否推广至SIRS／MODS的防治需进一步探
【学位授予单位】：中国医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2002
【分类号】：R363

【参考文献】