小鼠精子发生相关蛋白质的初步分析

发布时间：2020-08-23 15:08

【摘要】： 哺乳动物的精子发生是一个独特的细胞分裂分化过程。睾丸曲细精管生精上皮的生精细胞经过一系列复杂的分裂分化过程，最终形成成熟的精子。整个精子发生过程经历了三个阶段：即精原细胞的增殖、精母细胞的减数分裂和精子细胞的变态过程。成年睾丸的主要的功能是生成精子和产生雄性激素。许多在睾丸中特异表达或高度表达的蛋白质参与了这一过程。分离和鉴定睾丸内精子发生相关的蛋白质，对于在蛋白质水平上阐明精子发生的分子机制，对临床上男性不育的诊断和治疗以及男性节育手段的研究等均具有重要的理论意义。 传统的蛋白质分离和鉴定首先是运用不同的手段将生物组织中的蛋白质抽提出来，再用色谱、层析或电泳等方法使不同的蛋白质组分分开，最后借助某些特异性的酶对其一级结构进行分析，从而鉴定蛋白质。十九世纪七十年代双向凝胶电泳的发明，尤其是十九世纪八十年代的软电离技术的问世导致质谱技术发生了革命性的飞跃，再加上生物信息学的发展使得蛋白质的分离和鉴定克服了已往实验方法耗时长和通量低等缺点，从而使从蛋白质组水平上分离和鉴定蛋白质成为可能。然而，国内至今还未见有将这两种技术应用于生殖医学研究领域的报道。 为了分离和鉴定与精子发生相关的蛋白质，本研究首先建立了运用双向凝胶电泳和质谱技术分离和鉴定小鼠睾丸蛋白质的技术平台。提取成年小鼠睾丸总蛋白，第一相电泳分别用不同长度的胶条进行等电聚焦，然后用不同的检测手段进行检测，以获取最佳的分离条件； 南京医科大学硕士学位论文 切取凝胶上的蛋白点，酶解后用质谱分析得到其肽质量指纹谱；数据 库检索明确地鉴定了蛋白质。其次，为了分离与小鼠精子发生相关的 蛋白质，我们应用双向凝胶电泳分离一周龄和七周龄小鼠睾丸蛋白提 取液，经计算机软件图像分析和比较后，得到了49个在七周龄小鼠 睾丸中高表达的蛋白点，然后用质谱技术成功地鉴定了其中的22种 蛋白质，其中有13种已被证实与精子发生相关，其它9种蛋白质在 睾丸中未见相关报道，这些在小鼠睾丸不同发育阶段差异表达的蛋白 质可能在精子发生中起重要作用。 综上所述，我们成功地建立了运用双向凝胶电泳和质谱技术分离 和鉴定睾丸蛋白质的技术平台，并运用该技术平台对不同发育阶段的 小鼠睾丸蛋白质组进行了分离和比较，鉴定了22个在成年小鼠睾丸 高表达的蛋白质，为从蛋白质组水平上研究精子发生的机制奠定了坚 实的理论基础。
【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2003
【分类号】：R321
【图文】：

上样量为80wg，第一相采用llcmIPG胶条分离的银染双向凝胶电泳照片

上样量为800协g，第一相采用24cmIPG胶条分离的考染双向凝胶电泳照片

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本文编号：2801673