小鼠生殖细胞特异性转录因子SOHLH1调控Sox30基因表达的机制

发布时间：2021-02-03 03:10

　　目的 SOHLH1 （Spermatogenesis-and oogenesis-specific bHLH transcription factor-1）和SOX30（SRY box）是与精子发生相关的转录因子,Sohlh1与Sox30的基因敲除雄鼠均丧失生育能力。出生后7天Sohlh1基因敲除雄鼠DNA芯片显示Sox30表达显著下调,本文探究了早期发育相关转录因子SOHLH1对精子发生后期的关键基因Sox30基因的转录调控作用。方法构建Sox30启动子荧光素酶表达质粒,瞬时共同转染Sox30荧光素酶表达质粒和Sohlh1真核表达质粒并利用荧光素酶活性测定实验检测荧光值。通过染色质免疫共沉淀实验检测SOHLH1与Sox30启动子DNA序列特异序列的结合情况筛选主要激活位点。结果共转染Sohlh1真核表达质粒和Sox30启动子区域荧光素酶质粒的实验组荧光素酶活性高于对照组。SOHLH1与Sox30启动子上的特异性位点结合,在-489 bp位点的结合作用最强。结论精子发生早期重要转录因子SOHLH1可以直接激活顶体形成相关基因Sox30转录,-489 bp （CAGGTG）为主要特异性结... 

【文章来源】：中国比较医学杂志. 2019,29(07)北大核心

【文章页数】：6 页

【文章目录】：
1 材料和方法
    1.1 实验动物
    1.2 主要试剂与仪器
    1.3 实验方法
        1.3.1 基因组DNA提取
        1.3.2 Sox30基因启动子区域SOHLH1结合位点分析及引物设计
        1.3.3 PCR扩增Sox30基因启动子片段
        1.3.4 构建Sox30启动子全长和截短序列的pGL3-Sox30荧光素酶报告质粒
        1.3.5 转染293T细胞并检测双荧光素酶报告基因系统荧光素酶活性
        1.3.6 染色质免疫共沉淀 （ChIP） 实验筛选SOHLH1结合位点
    1.4 统计学方法
2 结果
    2.1 构建pGL3-Sox30启动子区域荧光素酶报告质粒
    2.2 双荧光素酶实验验证转录因子SOHLH1对Sox30基因启动子区的转录调节作用
    2.3 ChIP实验筛选转录因子SOHLH1与Sox30基因启动子区的主要结合位点
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]Stra8:生殖细胞有丝分裂转变为减数分裂前特异表达的基因[J]. 米美玲,杨蓓,徐斯凡,邹挺.  中华男科学杂志. 2009(01)



本文编号：3015807