转录因子JunD在HIV-1前病毒DNA转录调控中的作用研究

发布时间：2021-02-18 07:50

　　人类免疫缺陷病毒1型（HIV-1）潜伏感染的形成与AP-1家族蛋白的转录调节作用密切相关。为研究AP-1家族成员JunD分子在HIV-1潜伏感染形成中的作用,本研究基于可支持HIV-1复制的T细胞系Jurkat,构建敲除JunD和稳定（过）表达JunD的细胞系;拯救HIV-1假病毒并分别感染对照细胞、JunD敲除以及JunD稳定表达的细胞系,通过荧光素酶技术检测HIV-1前病毒DNA转录水平的变化。结果显示,与对照组相比,JunD敲除显著抑制了HIV-1的复制,而过表达JunD则促进了HIV-1的复制。该结果表明,JunD参与了HIV-1前病毒DNA的转录调控,并可能由此影响HIV-1在宿主细胞内的复制。本实验为研究激活HIV-1细胞潜伏感染的靶点提供了实验数据。 

【文章来源】：中国预防兽医学报. 2019,41(04)北大核心

【文章页数】：5 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 细胞系、质粒及主要试剂
    1.2 敲除J unD的J urka t细胞系的构建及敲除效果检测
        1.2.1 sg RNA设计、合成与重组质粒的构建
        1.2.2 嘌呤霉素最佳浓度的筛选
        1.2.3 表达sg RNA假病毒的制备
        1.2.4 sg RNA基因编辑活性鉴定
        1.2.5 敲除Jun D基因单克隆细胞的筛选与鉴定
    1.3 稳定 （过） 表达J unD的J urka t细胞系的构建与鉴定
        1.3.1 稳定 （过） 表达Jun D的重组质粒的构建与鉴定
        1.3.2 稳定 （过） 表达Jun D假病毒的制备
        1.3.3 假病毒感染与单克隆细胞筛选鉴定
    1.4 敲除或稳定表达J unD的细胞系对HIV前病毒DNA转录激活作用的检测
2 结果
    2.1 敲除J unD J urka t细胞系的构建及敲除效果检测
        2.1.1 嘌呤霉素最优工作浓度的确定
        2.1.2 sg RNA基因编辑活性检测结果
        2.1.3 Jun D基因敲除细胞系的检测
    2.2 稳定 （过） 表达J unD细胞系的构建及鉴定
        2.2.1 稳定表达Jun D质粒的构建与鉴定
        2.2.2 稳定 （过） 表达Jun D细胞系的检测
    2.3 敲除或稳定表达J unD对HIV-1前病毒DNA转录的影响
3 讨论



本文编号：3039267