转录因子ZFP580在缺氧预处理抗大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤中的作用
发布时间：2021-03-31 03:02
目的:通过观察缺氧预处理对心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及锌指核转录因子ZFP580表达的改变,探讨ZFP580的作用及机制。方法:培养大鼠H9c2心肌细胞,分为3组:（1）缺氧/复氧（H/R）组:H9c2心肌细胞换用模拟缺血溶液（pH=6.2）缺氧（95%N2+5%CO2）培养3 h,复氧培养2 h;（2）缺氧预适应（HPC）组:H9c2心肌细胞经3个循环的短暂缺氧（10 min）/复氧（20 min）处理后,进行同上H/R实验;（3）对照（C）组:正常培养的H9c2心肌细胞。通过MTT染色及LDH水平判定HPC的作用。Western blotting方法观察心肌细胞中转录因子ZFP580表达及ERK1/2磷酸化情况,以及ERK1/2磷酸化抑制剂PD98059对ZFP580表达的影响。分别构建高/低表达ZFP580的慢病毒载体并转染H9c2心肌细胞,经H/R实验后利用Annexin V-PE/7-AAD染色及流式细胞术检测H9c2细胞凋亡情况,Western bloting方法观察caspase-3活化情况。结果:HPC能显著改善H/R处理后H9c2心肌细胞存活率降低和LDH漏出的...
【文章来源】：中国病理生理杂志. 2014,30(09)北大核心CSCD
【文章页数】：6 页
【部分图文】：
HPC对H/Ｒ处理后心肌细胞中ZFP580表达及EＲK1/2磷酸化的影响
ing方法验证，慢病毒介导的基因转染能明显改变H9c2心肌细胞中ZFP580的表达水平，见图4A。转染Lenti-ZFP580使ZFP580高表达的H9c2心肌细胞在H/Ｒ损伤后，心肌细胞中活化caspase-3表达下降，明显低于转染Lenti-NC的阴性对照组。转染Lenti-siＲNA使ZFP580低表达或不表达的H9c2心肌细胞在H/Ｒ损伤后，心肌细胞中活化caspase-3表达上升，明显高于ZFP580高表达组及阴性对照组，见图4B。Figure3．EffectsofPD98059onHPC-inducedZFP580expres-sion．Mean±SD．n=6．*P＜0．05vsDMSOalone;#P＜0．05vsHPC+H/Ｒ+DMSO．图3PD98059对HPC处理后ZFP580表达的影响Figure4．Lentivirus-mediatedtransfectionofZFP580(A)affectedH/Ｒ-inducedcaspase-3activation(B)inH9c2cells．Mean±SD．n=6．*P＜0．05vsLenti-NCgroup．图4慢病毒介导的ZFP580基因转染对H/Ｒ处理后caspase-3表达的影响5AnnexinV-PE/7-AAD染色及流式细胞术检测结果转染不同慢病毒载体的H9c2心肌细胞经H/Ｒ处理后，流式细胞仪均可检测到凋亡细胞。转染Lenti-ZFP580后高表达ZFP580的H9c2心肌细胞在H/Ｒ损伤后细胞凋亡率明显低于转染Lenti-NC的阴性对照组，转染Lenti-siＲNA后低表达或不表达ZFP580的H9c2心肌细胞在H/Ｒ损伤后细胞凋亡率升高，明显高于ZFP580高表达组及阴性对照组，见图5。讨论缺氧预处理能增强机体对缺血、缺氧、缺血/再灌注等损伤的耐受性，然而其发挥保护作用的机制尚未完全阐明。有研究认为HPC的保护机制与其引起的大量内源性保护物质的释放有关，如腺苷、氧自由基清除酶、缓激肽及多种保护蛋白均被证实参与了HPC的保护作用［8-9］。然而，从细胞感受细胞外的缺氧信号，并将信号传至胞内，最终引起内源性保护物质的释放，其中必然存在复?
3PD98059对HPC处理后ZFP580表达的影响H9c2心肌细胞经PD98059预处理1h后进行HPC及H/Ｒ实验，Westernblotting结果显示PD98059预处理明显抑制HPC诱导的ZFP580的表达上调，而DMSO对照组细胞ZFP580在HPC及H/Ｒ后表达未受影响，见图3。4慢病毒介导ZFP580基因转染对H/Ｒ处理后caspase-3表达的影响经Westernblotting方法验证，慢病毒介导的基因转染能明显改变H9c2心肌细胞中ZFP580的表达水平，见图4A。转染Lenti-ZFP580使ZFP580高表达的H9c2心肌细胞在H/Ｒ损伤后，心肌细胞中活化caspase-3表达下降，明显低于转染Lenti-NC的阴性对照组。转染Lenti-siＲNA使ZFP580低表达或不表达的H9c2心肌细胞在H/Ｒ损伤后，心肌细胞中活化caspase-3表达上升，明显高于ZFP580高表达组及阴性对照组，见图4B。Figure3．EffectsofPD98059onHPC-inducedZFP580expres-sion．Mean±SD．n=6．*P＜0．05vsDMSOalone;#P＜0．05vsHPC+H/Ｒ+DMSO．图3PD98059对HPC处理后ZFP580表达的影响Figure4．Lentivirus-mediatedtransfectionofZFP580(A)affectedH/Ｒ-inducedcaspase-3activation(B)inH9c2cells．Mean±SD．n=6．*P＜0．05vsLenti-NCgroup．图4慢病毒介导的ZFP580基因转染对H/Ｒ处理后caspase-3表达的影响5AnnexinV-PE/7-AAD染色及流式细胞术检测结果转染不同慢病毒载体的H9c2心肌细胞经H/Ｒ处理后，流式细胞仪均可检测到凋亡细胞。转染Lenti-ZFP580后高表达ZFP580的H9c2心肌细胞在H/Ｒ损伤后细胞凋亡率明显低于转染Lenti-NC的阴性对照组，转染Lenti-siＲNA后低表达或不表达ZFP580的H9c2心肌细胞在H/Ｒ损伤后细胞凋亡率升高，明显高于ZFP580高表达组及阴性对照组，见图5。讨论缺氧预处理能增强机体对缺血、缺氧、缺血/再灌注等损伤的耐受
【参考文献】：
期刊论文
[1]慢病毒介导LOX-1基因RNA干扰抑制氧化应激诱导心肌细胞凋亡[J]. 刘彬,黄佳城,周迎春,孙学刚,曾文璧,李杏,臧书文,郝文文. 南方医科大学学报. 2012(02)
[2]大鼠心肌缺血-再灌注损伤中转录因子ZFP580表达的变化[J]. 孟祥艳,宋立新,罗玉玉,董化江,郭敏,梁彦军,张文成. 中国病理生理杂志. 2011(06)
[3]心肌缺血/再灌注损伤中细胞凋亡的信号转导通路[J]. 武蓓,陈红,任景怡,乔正国. 中国医药导刊. 2007(05)
[4]低密度脂蛋白降调节新基因cDNA的克隆及结构分析[J]. 张文成,陈保生,吴刚,曾武威,薛红. 中华医学杂志. 2001(07)
本文编号：3110655
【文章来源】：中国病理生理杂志. 2014,30(09)北大核心CSCD
【文章页数】：6 页
【部分图文】：
HPC对H/Ｒ处理后心肌细胞中ZFP580表达及EＲK1/2磷酸化的影响
ing方法验证，慢病毒介导的基因转染能明显改变H9c2心肌细胞中ZFP580的表达水平，见图4A。转染Lenti-ZFP580使ZFP580高表达的H9c2心肌细胞在H/Ｒ损伤后，心肌细胞中活化caspase-3表达下降，明显低于转染Lenti-NC的阴性对照组。转染Lenti-siＲNA使ZFP580低表达或不表达的H9c2心肌细胞在H/Ｒ损伤后，心肌细胞中活化caspase-3表达上升，明显高于ZFP580高表达组及阴性对照组，见图4B。Figure3．EffectsofPD98059onHPC-inducedZFP580expres-sion．Mean±SD．n=6．*P＜0．05vsDMSOalone;#P＜0．05vsHPC+H/Ｒ+DMSO．图3PD98059对HPC处理后ZFP580表达的影响Figure4．Lentivirus-mediatedtransfectionofZFP580(A)affectedH/Ｒ-inducedcaspase-3activation(B)inH9c2cells．Mean±SD．n=6．*P＜0．05vsLenti-NCgroup．图4慢病毒介导的ZFP580基因转染对H/Ｒ处理后caspase-3表达的影响5AnnexinV-PE/7-AAD染色及流式细胞术检测结果转染不同慢病毒载体的H9c2心肌细胞经H/Ｒ处理后，流式细胞仪均可检测到凋亡细胞。转染Lenti-ZFP580后高表达ZFP580的H9c2心肌细胞在H/Ｒ损伤后细胞凋亡率明显低于转染Lenti-NC的阴性对照组，转染Lenti-siＲNA后低表达或不表达ZFP580的H9c2心肌细胞在H/Ｒ损伤后细胞凋亡率升高，明显高于ZFP580高表达组及阴性对照组，见图5。讨论缺氧预处理能增强机体对缺血、缺氧、缺血/再灌注等损伤的耐受性，然而其发挥保护作用的机制尚未完全阐明。有研究认为HPC的保护机制与其引起的大量内源性保护物质的释放有关，如腺苷、氧自由基清除酶、缓激肽及多种保护蛋白均被证实参与了HPC的保护作用［8-9］。然而，从细胞感受细胞外的缺氧信号，并将信号传至胞内，最终引起内源性保护物质的释放，其中必然存在复?
3PD98059对HPC处理后ZFP580表达的影响H9c2心肌细胞经PD98059预处理1h后进行HPC及H/Ｒ实验，Westernblotting结果显示PD98059预处理明显抑制HPC诱导的ZFP580的表达上调，而DMSO对照组细胞ZFP580在HPC及H/Ｒ后表达未受影响，见图3。4慢病毒介导ZFP580基因转染对H/Ｒ处理后caspase-3表达的影响经Westernblotting方法验证，慢病毒介导的基因转染能明显改变H9c2心肌细胞中ZFP580的表达水平，见图4A。转染Lenti-ZFP580使ZFP580高表达的H9c2心肌细胞在H/Ｒ损伤后，心肌细胞中活化caspase-3表达下降，明显低于转染Lenti-NC的阴性对照组。转染Lenti-siＲNA使ZFP580低表达或不表达的H9c2心肌细胞在H/Ｒ损伤后，心肌细胞中活化caspase-3表达上升，明显高于ZFP580高表达组及阴性对照组，见图4B。Figure3．EffectsofPD98059onHPC-inducedZFP580expres-sion．Mean±SD．n=6．*P＜0．05vsDMSOalone;#P＜0．05vsHPC+H/Ｒ+DMSO．图3PD98059对HPC处理后ZFP580表达的影响Figure4．Lentivirus-mediatedtransfectionofZFP580(A)affectedH/Ｒ-inducedcaspase-3activation(B)inH9c2cells．Mean±SD．n=6．*P＜0．05vsLenti-NCgroup．图4慢病毒介导的ZFP580基因转染对H/Ｒ处理后caspase-3表达的影响5AnnexinV-PE/7-AAD染色及流式细胞术检测结果转染不同慢病毒载体的H9c2心肌细胞经H/Ｒ处理后，流式细胞仪均可检测到凋亡细胞。转染Lenti-ZFP580后高表达ZFP580的H9c2心肌细胞在H/Ｒ损伤后细胞凋亡率明显低于转染Lenti-NC的阴性对照组，转染Lenti-siＲNA后低表达或不表达ZFP580的H9c2心肌细胞在H/Ｒ损伤后细胞凋亡率升高，明显高于ZFP580高表达组及阴性对照组，见图5。讨论缺氧预处理能增强机体对缺血、缺氧、缺血/再灌注等损伤的耐受
【参考文献】：
期刊论文
[1]慢病毒介导LOX-1基因RNA干扰抑制氧化应激诱导心肌细胞凋亡[J]. 刘彬,黄佳城,周迎春,孙学刚,曾文璧,李杏,臧书文,郝文文. 南方医科大学学报. 2012(02)
[2]大鼠心肌缺血-再灌注损伤中转录因子ZFP580表达的变化[J]. 孟祥艳,宋立新,罗玉玉,董化江,郭敏,梁彦军,张文成. 中国病理生理杂志. 2011(06)
[3]心肌缺血/再灌注损伤中细胞凋亡的信号转导通路[J]. 武蓓,陈红,任景怡,乔正国. 中国医药导刊. 2007(05)
[4]低密度脂蛋白降调节新基因cDNA的克隆及结构分析[J]. 张文成,陈保生,吴刚,曾武威,薛红. 中华医学杂志. 2001(07)
本文编号：3110655
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