沙门菌质粒毒力基因spvC敲除株的构建及其对宿主细胞自噬的影响

发布时间：2021-04-04 00:26

　　目的:通过λRed重组系统构建鼠伤寒沙门菌质粒毒力基因（Salmonella plasmid virulence gene,spv）spv C敲除株STM-Δspv C,并利用原核表达载体p BAD/gⅢ构建spv C回补株STM-c-spv C。以鼠伤寒沙门菌（Salmonella enterica serovar Typhimurium,S.typhimurium,STM）野生株STM-WT和所构建菌株作为受试菌,建立斑马鱼和He La细胞感染模型,研究spv C在感染过程中对宿主细胞自噬的影响,并探究其可能的作用机制,为通过调控细胞自噬来预防和控制沙门菌感染提供新的思路和方法。方法:一、沙门菌质粒毒力基因spv C敲除株和回补株的构建1.利用λRed重组系统构建spv C敲除株根据spv C基因上下游序列设计5’端含有spv C同源序列的引物,以质粒p KD4为模板,扩增得到两侧含FRT位点、中间为卡那霉素抗性基因的线性DNA片段。同时利用已电转入质粒p KD46的STM-WT菌株,经L-阿拉伯糖诱导表达重组蛋白,使其具有同源重组的能力。将线性DNA片段电转入具重组功能的感受态S... 

【文章来源】：苏州大学江苏省

【文章页数】：76 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文提要
Abstract
引言
第一部分 鼠伤寒沙门菌质粒毒力基因spvC敲除株的构建
    1 材料与方法
    2 结果
    3 讨论
第二部分 沙门菌质粒毒力基因spvC对斑马鱼感染过程和自噬的影响
    1 材料与方法
    2 结果
    3 讨论
第三部分 沙门菌质粒毒力基因spvC对HeLa细胞自噬的影响及机制探讨
    1 材料与方法
    2 结果
    3 讨论
小结
参考文献
综述
    参考文献
英文缩略词表
攻读学位期间公开发表论文
学术会议报告
本课题所获的基金资助
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]利用λRed重组系统敲除鼠伤寒沙门氏菌sopB基因[J]. 李晔,张西轩,郭梦征,王素英,张坤生,阮海华.  生物技术通报. 2014(09)
[2]工业微生物代谢途径调控的基因敲除策略[J]. 于慧敏,马玉超.  生物工程学报. 2010(09)



本文编号：3117374