蠲痹历节清方对痛风细胞模型中TLR4/NF-κB信号通路主要元件的影响

发布时间：2021-06-24 18:11

　　目的:研究蠲痹历节清方对痛风作用及对TLR4/NF-κB信号通路主要元件的影响。方法:实验分为两部分,①不添加TLR4受体抑制剂部分;②添加TLR4受体抑制剂部分。每部分利用单钠尿酸盐（MSU）结晶诱导巨噬细胞产生痛风模型,随机分正常对照组、模型组、蠲痹历节清方组,并分别干预。用Westen-blot法测定干预后巨噬细胞中髓样分化分子88（MyD88）、IκB激酶-β（IKK-β）、NF-κB抑制蛋白α（IκB-α）蛋白表达,RT-PCR测定干预后各组巨噬细胞中Toll样受体4（TLR4）基因表达;免疫荧光法检测巨噬细胞核转录因子kappa B（NF-κB）核移位情况;ELISA法检测白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）。结果:不添加TLR4受体抑制剂部分:与正常对照组相比,模型组MyD88蛋白、IKK-β、TLR4 mRNA表达含量明显升高;TNF-α、IL-6、IL-1β含量明显升高;IκB-α蛋白明显降低。与模型组比较,蠲痹历节清方组中MyD88蛋白、IKK-β、TLR4 mRNA表达含量明显降低;TNF-α、IL-6、IL-... 

【文章来源】：中药药理与临床. 2019,35(01)北大核心CSCD

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

蠲痹历节清13．6%含药血清对巨噬细胞中TLＲ4mＲNA相对表达1:空白对照;2:

n=10)组别剂量/(g/kg)未添加受体抑制剂添加受体抑制剂正常对照--0．72±0．030．84±0．05＊△模型对照--1．84±0．111．61±0．06△蠲痹历节清方440．92±0．04*0．80±0．07＊△表7蠲痹历节清13．6%含药血清对巨噬细胞中IκB-α蛋白的相对IOD的影响(x珋±s，n=10)组别剂量(g/kg)未添加受体抑制剂部分添加受体抑制剂部分正常对照--1．04±0．07*1．77±0．11△模型对照--0．88±0．031．35±0．09△蠲痹历节清方440．95±0．04*1．59±0．16＊△图6蠲痹历节清13．6%含药血清对巨噬细胞β-actin蛋白表达的影响(×200)中药药理与临床2019;35(1)751

图7蠲痹历节清13．6%含药血清对巨噬细胞MyD88蛋白表达的影响(×200)图8蠲痹历节清13．6%含药血清对巨噬细胞IKK-β蛋白表达的影响(×200)1、2、3为未添加TLＲ受体抑制剂实验部分:1:空白对照;2:模型对照;3:蠲痹历节清方44g/kg;4、5、6为添加TLＲ受体抑制剂实验部分:5:空白对照;6:模型对照;7:蠲痹历节清方44g/kg。图9蠲痹历节清13．6%含药血清对巨噬细胞IκB-α蛋白表达的影响(×200)2．4NF-κB核移位情况正常培养的巨噬细胞NF-κB主要表达在细胞浆，镜下呈红色荧光，核表达很少，而模型组红色荧光主要表达于细胞核，胞浆表达明显减少［8，9］。从图10、11可以看出，两部分实验培养的巨噬细胞，经免疫荧光染色检测，正常对照组中NF-κB主要集中在细胞浆，细胞核中表达较少;模型组中NF-KB蛋白表达呈猩红色明显增强，主要集中在细胞核中，细胞浆中较少，表明NF-κB核移位明显;蠲痹历节清方组NF-κB主要在细胞浆中，细胞核中相对较少，未出现明显NF-κB核移位情况。加入TLＲ4受体抑制剂部分，各组巨噬细胞NF-κB表达明显受到抑制。说明蠲痹历节清方可抑制NF-κB核移位。TＲITC和DAPI合成图，红色代表NF-κBp65表达，蓝色代表细胞核(下同)。图10蠲痹历节清13．6%含药血清对巨噬细胞中NF-κB核移位的影响(未添加TLＲ4阻断剂部分，×200)图11蠲痹历节清13．6%含药血清对巨噬细胞中NF-κB核移位的影响(添加TLＲ4阻断剂部分，×200)3讨论随着人民生活水平的提高及饮食结构改变，痛风在我国的发病率呈现逐年上升趋势［10，11］。痛风一旦发?

【参考文献】：
期刊论文
[1]蠲痹历节清方对改良痛风性关节模型大鼠滑膜的TLR4,NF-κB,PPARγ的影响[J]. 郭玉星,熊辉,易法银,朱方晓,陆小龙,周彪,齐新宇,向黎黎,邵先舫.  中国实验方剂学杂志. 2018(23)
[2]蠲痹历节清方对急性痛风性关节炎大鼠的影响及其作用机制[J]. 尤卓,熊辉,吴海金,郭玉星,周彪,齐新宇,向黎黎.  中医正骨. 2018(02)
[3]蠲痹历节清方对大鼠痛风性关节炎关节肿胀指数和滑膜组织中炎症因子的影响[J]. 周彪,郭玉星,陆小龙,周友良,曾鹏,齐新宇,熊辉.  云南中医学院学报. 2017(03)
[4]IL-1β、IL-6、TNF-α与急性痛风性关节炎的相关性研究[J]. 梁翼,李敏,吴晓惠,余文景,沙湖,赵琛,夏琴,罗晓娇.  中国中医骨伤科杂志. 2014(09)



本文编号：3247591