人巨细胞病毒（HCMV）PP71基因的克

发布时间：2021-07-10 14:09

　　人巨细胞病毒（Human Cytomegalorvirus HCMV）PP71基因是HCMV基质蛋白基因，能够增加病毒繁殖，加快病毒在细胞间传递；该PP71蛋白单独存在时，是一种较强的抗原蛋白，可刺激机体产生抗体，有助于清除病毒。为了进一步研究PP71基因在大肠杆菌中的表达及纯化蛋白在病毒繁殖中的作用，为该病毒致病性、诊断及治疗研究提供科学依据。本论文研究了PP71基因的克隆、测序、在原核中的表达及纯化蛋白对病毒繁殖的作用。实验采用聚合酶链式反应（Polymerase chain reaction PCR）方法，扩增HCMV-PP71基因，并连接到表达载体pET28a上，构建了pET28a-PP71重组表达载体，转化到表达宿主菌BL21（DE3）中进行表达，对PP71基因DNA片段进行测序，与基因库中的标准序列比较，同源性为99.69％，证明该基因是一保守基因。同时利用异丙基－β－D－硫代半乳糖苷（IPTG）诱导，高效地表达出目的蛋白，分子量为40KD，与理论分子量一致，占菌体总蛋白的39％左右；经亲和层析纯化，纯度达到总目的蛋白的91％。研究不同OD₆₀₀值、温... 

【文章来源】：中国科学院大学(中国科学院武汉病毒研究所)湖北省

【文章页数】：54 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
一、 中文摘要
二、 英文摘要
三、 前言
四、 材料
五、 实验方法
六、 结果与分析
七、 讨论
八、 参考文献
九、 已公开发表的论文
十、 致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]一种新的PCR产物回收方法[J]. 张裕平,陈立群,李天宪.  中华微生物学和免疫学杂志. 2001(01)
[2]3种疱疹科病毒DNA提取方法的建立[J]. 张裕平,李天宪,张俊杰,陶生策.  中华微生物学和免疫学杂志. 2000(02)
[3]巨细胞病毒的分子生物学研究现状与优生优育[J]. 陈悦.  中国优生与遗传杂志. 2000(01)
[4]巨细胞病毒感染与免疫[J]. 杜丽华,明景裕.  云南医药. 1999(06)
[5]人巨细胞病毒转化作用的研究进展[J]. 刘朝奇.  国外医学(微生物学分册). 1997(05)
[6]巨细胞病毒活动性感染的分子生物学特点[J]. 史金阳.  国外医学(儿科学分册). 1997(05)
[7]在大肠杆菌表达体系中以包涵体形式存在的真核生物蛋白质的分离、复性和二硫键的形成[J]. 陈来同,茹炳根.  中国生化药物杂志. 1997(01)
[8]巨细胞病毒感染的诊断、治疗和预防[J]. 杨绍基.  国外医学(内科学分册). 1996(09)
[9]以包涵体形式存在的重组蛋白的纯化和体外折叠[J]. 凌明圣,许祥裕,丁树标.  中国生化药物杂志. 1995(03)
[10]巨细胞病毒与肿瘤[J]. 张笑人,魏海明.  国外医学(微生物学分册). 1994(06)



本文编号：3276060