抗HBV药物筛选细胞模型和动物模型研究

发布时间：2021-07-11 14:17

　　目的：扩增重庆麻鸭血清中的鸭乙肝病毒基因组，克隆入测序质粒，测序后进行序列分析，为下一步利用该株病毒进行动物体内药物筛选打好基础。方法：从自然感染鸭乙肝病毒（DHBV）的重庆麻鸭血清中提取DHBV DNA，用PCR方法鉴定后再通过PCR方法扩增完整基因组，将扩增片段克隆入载体pGEM-T中，经过酶切和PCR鉴定后，进行测序，然后用DNAtool、ClustalX和Phylip软件分析所得序列。结果： （1）.用位于S区的引物扩增鸭血清提取物，证实所得提取物确为DHBV DNA；（2）.用PCR方法扩增DHBV DNA，扩增出长度为3.0kb的单一条带，与预期相符；（3）.将PCR扩增所得片段克隆入PGEM-T载体，经酶切和PCR鉴定，证实该3.0 kb片段已被插入载体中；（4）.重组质粒测序结果表明，质粒中的插入片段确为DHBV DNA；（5）.测得序列用相关软件分析表明，该株重庆麻鸭乙肝病毒（DHBVcq）基因组全长3024bp, 至少含有3个开放读码框架，在核酸水平和蛋白质水平均存在许多与功能相关的保守序列，同时也具有<WP=7>不同于其它大多数DHBV的特点。进化分析... 

【文章来源】：重庆医科大学重庆市

【文章页数】：60 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

快速法初筛重组质粒Fig1-6Preliminaryscreenofrecombinantplasmidswithrapidextraction.

蛋白 该 ORF 并不以 AUG 为起始密码 而可能是以 TTG ATT或 在 DHBVcq 的 2292 2636nt 内也存在类似读码框架 S.F Cha相应长度的 XmRNA 推测 X 蛋白可能从更长的病毒 mRNA 如 Cm XmRNA 量极少而不能以现有方法检测增强子位于 DHBV2172-2351nt 多种核因子可结合于该区[3]GCAAT 出现在 DHBVcq2189-2193nt HNF1 结合顺序 AGTTAATGA3-2297nt,HNF3结合顺序TGTTTGC位于2220-2226nt,2326-2332n图 1-11 DHBV基因结构图Fig.1-11 Gene organization of DHBVcq and location of regulation elements. PreS gene promoter. S-P, S gene promoter. P-P, PgRNA promoter. , pgRregion. ENH, enhancer. C/EBP, CCAAT/enhancer binding protein. Hheatocyte nuclear factor 3. HNF1, hepatocyte nuclear factor 1.

重庆医科大学硕士研究生论已报道的 DHBV 株都很保守 DH件将 DHBVcq 及 GenBank 中公布lip 软件构建进化树 应用的评估 从进化树可以看出 DHB


本文编号：3278255