汉坦病毒的基因分型、变异及其检测的分子生物学研究

发布时间：2021-08-12 06:32

　　肾综合征出血热（HFRS）是人类的一种急性传染病，并广泛分布于世界各地；其临床特征为高热、广泛出血和急性肾功能衰竭。引起该病的病原体是布尼亚病毒科汉坦病毒属中的某些病毒，其四种血清型的代表株分别为汉滩病毒（HTN）、汉城病毒（SEO）、普马拉病毒（PUU）和希望山病毒（PH），相应的主要储存宿主分别是黑线姬鼠、褐家鼠、欧洲棕背（鼠平）和田鼠；除希望山病毒外，HTN、SEO和PUU三型病毒又分别引起重型、中型和轻型的肾综合征出血热。除此之外，新近又有四种基因型别的汉坦病毒被发现：泰国病毒（Thai）、多布拉伐—贝尔格莱德病毒（DOB）、索托帕拉亚病毒（TPM）和美国的汉坦病毒肺综合征病毒（HPS）。血清学研究表明在中国主要是由HTN和SEO两型病毒引起肾综合征出血热；因此建立检测汉坦病毒核酸的方法、研究汉坦病毒的基因分型和变异，对汉坦病毒的流行病学调查、实验室诊断和发病机理的研究均具有重要意义。 由于汉坦病毒是分节段的单股负链RNA病毒，本文首先建立了 

【文章来源】：中国人民解放军空军军医大学陕西省 211工程院校

【文章页数】：102 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

RT一PCR检测l~10天Vero一E6感染细胞的结果

结果Hinol能将扩增产物切成两条带，Hael能将扩增产物切成3一4条带，酶切后所得条带大小与理论设计完全吻合。限制性酶切分析的电泳结果见图2。4.2巢式PCR以PCR扩增产物为模板，BS、B6为引物，进行巢式PCR扩增，所得二次扩增产物的大小约4obop，与理论值完全一致，电泳结果见图2。.43PCR产物的序列分析将汉坦病毒Ag株代替76一118株后，重复上述试验，得到完全类似的实验结果。将Ag的PCR产物纯化后直接测序，并将Ag株M片段的序列输入计算机后与汉坦病毒的代表株76一118M片段的序列「“〕进行比较，结果两者的同源性为81.8%

上述结果除Lekay毒株外，均与血清分型结果相吻合，并与国内梁米芳卿〕等采用单克隆抗体的分型结果一致。各毒株的基因分型结果见表3，I型和亚型病毒分型的电泳结果分别见图1和图2。123456M上行自左至右:1.下行自左至右:L图lM56;血清A96;3Maaji;R36:4.Ag;5.Chen;6.76一11884一FLi;4.Hl;5.JR;6.A537型汉坦病毒的PCR分型电泳结果


本文编号：3337788