幽门螺杆菌毒力因子对胃上皮细胞增殖与凋亡的影响

发布时间：2021-08-29 02:22

　　目的 研究幽门螺杆菌（Hp）CagA 、OipA、UreB、UreC 4种毒力因子对胃上皮细胞增殖与凋亡的影响, 旨在寻找Hp的致癌组分, 同时也为这4种毒力因子DNA疫苗的研制提供安全性指标。方法 用RT-PCR方法从国际标准株NCTC11637中获取cagA、ureB 全长基因,克隆入pGEM-T Easy载体并测序,以本次实验获得的连接于T 载体上的cagA、ureB及本实验室曾采用同样的方法获得的连接于T 载体上的oipA和 ureC全长基因为模板,将4种基因的开放读码框架定向克隆入pcDNA3.1载体,构建4种基因的真核重组子;获得的4种重组子及载体pcDNA3.1以脂质体介导转染SGC-7901细胞,筛选耐潮霉素的细胞克隆;用RT-PCR方法检测细胞内4种基因在转录水平的表达,用鸡抗OipA抗体、鸡抗UreC抗体以Immuno-blot方法检测OipA和UreC蛋白水平的表达;用荧光染色技术、MTT、流式细胞术检测各基因的表达对细胞表型、增殖、凋亡及生长周期的影响。结果 成功地构建了4种基因的真核重组子pccagA、 pcureB、 pcoipA、pcureC和含相应... 

【文章来源】：福建医科大学福建省

【文章页数】：53 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

ureB、cagA基因测序图

Immuno-blot 检测 UreC、OipA 蛋白的表达AB：：阳性对照组，Hp 水煮蛋白，点样量 5ul：实验组，SureC 细胞裂解物：对照组，SpcDNA3.1 细胞裂解物：实验组，SoipA 细胞裂解物：对照组，SpcDNA3.1 细胞裂解物、C、D 组 1-4 从左向右点样量依次为：5ul、10ul、15u

2-1 荧光显微镜下 SpcDNA3.1、ScagA、 SureB、 SoipA、SureC 细胞形态学特征（400×， AO/EB 染色） SpcDNA3.1 ； 2-4 ScagA ； 5 SoipA ； SureB； 7 SureC巨细胞样变，↑胞浆空泡样变，↑异形细胞，↑胞膜皱缩，↑胞膜突起、出芽

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3369705