人类端粒酶逆转录酶基因的原核表达及其表达产物抗体的制备

发布时间：2021-09-07 14:13

　　背景 端粒酶（Telomerase）是一种核糖核蛋白，具有维护染色体末端结构的功能；在细胞老化、癌变和永生化中具有重要的潜在作用。其中人类端粒酶的逆转录酶（hTERT）在大约85-95％的人体肿瘤组织表达，是肿瘤的一个重要标志，检测hTERT蛋白的表达情况在肿瘤的诊断和预后方面具有重要作用。 目的 制备人类端粒酶的逆转录酶（hTERT）抗体并探索其在肿瘤检测和研究中的应用。 方法 （1）利用pET原核表达载体构建表达了hTERT特异性的T基序区和hTERT C区的重组蛋白，IPTG诱导重组蛋白表达，大量提取并纯化重组蛋白包涵体；（2）应用纯化的重组蛋白包涵体免疫家兔制备抗hTERT的抗体，同时留取免疫前血清做为阴性对照；（3）将纯化的重组蛋白通过Western Blot检测抗体产生情况并确定抗体滴度；（4）应用制备的抗体通过Western Blot、免疫组织化学法检测肿瘤和肿瘤细胞系细胞中端粒酶的表达情况。 结果 （1）hTERT T基序区和C区重组蛋白在大肠杆菌中主要以包涵体形式存在，（2）以经过纯化的hTERT T基序区和C区两种重组蛋白包涵体为抗原免疫家... 

【文章来源】：天津医科大学天津市 211工程院校

【文章页数】：78 页

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