人CD34+造血干/祖细胞和日本血吸虫的转录组学和蛋白质组学研究

发布时间：2021-09-24 12:52

　　本论文在杨芃原教授和韩泽广研究员的指导下进行，主要工作在国家人类基因组南方研究中心完成。本博士论文的主要贡献为：1．对人CD34+造血干／祖细胞进行了转录组和蛋白质组学研究，鉴定了370个蛋白质，这是迄今为止鉴定最多的CD34+细胞蛋白，并且鉴定了各种转录组研究没能发现的133个CD34+细胞蛋白，发现了CD34+细胞具有可塑性的新的证据，证明了反义核酸未能完全阻止其相应基因的表达，并提出一些蛋白的异质性是由于翻译后修饰造成；2．对日本血吸虫进行了大规模转录组学和蛋白质组学研究，得到了大量的重要发现。获得了约15000个基因种类，约占日本血吸虫基因总数的90％，其中包括8400多个血吸虫基因编码蛋白质，建立了目前世界上最大的日本血吸虫功能基因组公共数据库、基因克隆库和菌种库；鉴定了3260个不同生活周期的以及表皮的血吸虫蛋白，并首次鉴定了卵壳蛋白，提供了众多药物靶点和潜在疫苗的选择；在血吸虫基因中发现了大量的遗传多态性位点，并用序列测定和蛋白质组数据验证；分析得到了血吸虫保守的和特异的蛋白，为认识血吸虫生物学特征、开发抗血吸虫药物以及研制血吸虫疫苗奠定了理论基础；3．鉴定并分析了纯化后... 

【文章来源】：复旦大学上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：175 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

Ilses具有分化为多种血液细胞的潜力

往往难以溶解，造成蛋白损失。解决办法是，少量多次加入，结合超声和煮沸，反复提取，在使用了DNA酶和RNA酶作用以及丙酮沉淀不谈，图IB的胶点更分散、更清晰。我们的多

复旦大李博士格文消化时，我们也采用了独特的方法。我们使用PCR仪做温度反应。一则PCR仪控温准确，二则有热盖，避免长时间酶解中的水分蒸发。而且使用的是PCR管，体积小，管底为尖状，样品集中，而且管壁光滑减少样品吸附损失，尤其当蛋白胶点很小的时候。Zintip去盐。虽然理论上MALDI耐盐，但ZIPtiP除盐可以极大地改善谱图质量，因此该步不能省略。4.5难溶蛋白沉淀的处理丙酮沉淀后大部分蛋白可以溶解，少量蛋白难溶。在抽提组织蛋白时，也会遇到有部分蛋白难以溶解情况。为提高蛋白分析的覆盖率，我们用含有高浓度SDS的蛋白电泳缓冲液，结合高温和超声波处理，尽量抽提沉淀中的难溶蛋白，再用一维SDS一队GE分离，割条带胶内酶解后用在线反相色谱一质谱分析(图3)。


本文编号：3407786