骨形态发生蛋白9基因敲除小鼠的构建

发布时间：2021-09-30 02:56

　　目的运用CRISR/Cas9技术敲除小鼠基因组中Bmp9基因片段,构建Bmp9基因敲除小鼠。方法根据Bmp9基因的外显子序列,设计一段sgRNA并合成。sgRNA体外转录后和Cas9 mRNA混合后显微注射受精卵细胞,注射后的受精卵细胞移植至受体动物获得子代小鼠。提取子代小鼠基因组DNA测序鉴定其基因型。基因型鉴定正确的小鼠与野生型交配后筛选纯合子小鼠。同时取纯合子小鼠心脏、肝、脾、肺、肾,匀浆后提取总RNA和总蛋白,通过q PCR、WB和免疫组化检测BMP9在各组织中的表达。结果设计并合成20 bp的sgRNA并进行体外转录,显微注射并回植后得到基因突变小鼠,连续交配后得F2代纯合子。测序结果显示,突变小鼠存在两种基因型,一种为5 bp缺失突变,另一种为13 bp缺失并伴有1 bp插入突变。与野生型C57BL/6相比,q PCR、WB和免疫组化结果均表明基因敲除小鼠肝中BMP9表达显著降低。结论利用CRISPR/Cas9技术成功构建出了BMP9基因敲除小鼠。 

【文章来源】：中国实验动物学报. 2019,27(03)北大核心CSCD

【文章页数】：5 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 实验动物
        1.1.2 试剂与仪器
    1.2 方法
        1.2.1 sgRNA重组质粒的构建
        1.2.2 体外转录
        1.2.3 显微注射及胚胎移植
        1.2.4 基因型鉴定和纯合子的筛选
        1.2.5 BMP9在肝组织中的表达
2 结果
    2.1 构建质粒及体外转录
    2.2 基因型鉴定
    2.3 BMP9在敲除小鼠肝组织中的表达
        2.3.1 BMP9 mRNA和蛋白在敲除小鼠中的表达
        2.3.2 免疫组化
3 讨论



本文编号：3414984