乙酰胆碱受体α亚基的可溶性融合表达及其生物活性的研究

发布时间：2021-10-12 07:30

　　乙酰胆碱受体（AChR）是肌肉神经传导的重要媒介，是神经突触处化学信号与电信号相互转移的关键物质。在神经兴奋传导过程中，神经细胞膜的兴奋能够引起乙酰胆碱与膜由结合状态释放为自由状态。自由状态的乙酰胆碱作为一种化学信号能与接受信号的神经细胞的后突触的突触膜上的乙酰胆碱受体结合，引起乙酰胆碱受体和相关膜蛋白的构象变化，因而使兴奋传递下去。通常机体内不产生乙酰胆碱受体的抗体，但在自身免疫性疾病-肌无力症患者的体内，由于某些原因，如遗传和免疫反应等，产生了乙酰胆碱受体的抗体。这种异常抗体可与乙酰胆碱受体结合，引起与机体内乙酰胆碱结合的乙酰胆碱受体的数量的减少，削弱神经突触间的传递，导致重症肌无力的发生。 因此，乙酰胆碱受体（AChR）结构与功能的研究是突破重症肌无力症发病机理和可能治疗手段的关键。但要从生物组织获得乙酰胆碱受体，由于得率太低，分离纯化困难，不能满足肌无力症的机理和治疗研究的需求。利用基因工程技术，获得目的蛋白无疑是比较理想的手段。但是乙酰胆碱受体的可溶性表达一直是困扰科研工作者的瓶颈问题，大多数融合表达产物都以包涵体的形式存住，这样为下一步的有关乙酰胆碱受体的结构和功能方... 

【文章来源】：山西大学山西省

【文章页数】：44 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 文献综述
    一. 乙酰胆碱受体的形成，发育和再生
    二. 正常乙酰胆碱受体的形态学
    三. 正常乙酰胆碱受体(AChR)的结构和功能
    四. 乙酰胆碱受体的作用机理
    五. AChR亚基突变对MG发病的影响
    六. 肌肉乙酰胆碱受体与自身免疫应答反应
    七. 神经乙酰胆碱受体与自身免疫应答反应
    八. 重症肌无力与其它自身免疫疾病的治疗
    九. 引起乙酰胆碱受体结构改变的因素
    十. 病理情况下乙酰胆碱受体的形态学
第二章 实验部分
    1 材料
        1.1 菌种与质粒
        1.2 工具酶及主要生化试剂
        1.3 免疫分析试剂
        1.4 主要试剂配制
    2 方法
        2.1 AChRα_(205)基因片段的克隆及重组子pMARα_(205)的构建
        2.2 MBP-AChRα_(205)蛋白的融合表达
        2.3 MBP-AChRα_(205)蛋白的纯化
        2.4 MBP-AChRα_(205)蛋白的酶切
        2.5 MBP-AChRα_(205)和AChRα_(205)蛋白的免疫学性质分析
    3 实验结果
        3.1 重组子pMARα_(205)的构建流程图
        3.2 重组子pMARα_(205)的双酶切分析
        3.3 MBP-AChRα_(205)蛋白的表达
        3.4 MBP-AChRα_(205)的免疫学活性
        3.5 MBP-AChRα_(205)的纯化
        3.6 融合蛋白MBP-AChRα_(205)的Factor Xa酶切
        3.7 融合蛋白MBP-AChRα_(205)与Factor Xa酶切产物的Western blotting分析
        3.8 融合蛋白MBP-AChRα_(205)与Factor Xa酶切产物的ELISA检测
    4 讨论
参考文献
附录(已发表和待发表的叙述论文)
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]乙酰胆碱受体分子结构的研究进展[J]. 徐世元.  国外医学.麻醉学与复苏分册. 1997(04)
[2]中枢烟碱样乙酰胆碱受体的分子药理学研究进展[J]. 宫泽辉.  国外医学.药学分册. 1997(02)



本文编号：3432139