usp9y与Nna1基因的相互作用及对精子发生的影响

发布时间：2021-10-12 17:04

　　目的探究usp9y与引起该小鼠不育表型的突变基因Nna1之间的关系,以及该基因在精子发生中的影响。方法用分子克隆法构建pEGFP-usp9y-（nt1558-1955）真核表达载体,转染到HEK293T细胞中,检测其表达;将pEGFP-usp9y-（nt1558-1955）和pCMV-Myc-Nna1共转染至HEK293T细胞中,通过免疫共沉淀法分析usp9y和Nna1蛋白之间的相互作用;运用单基因表达谱法研究浦肯野细胞变性（pcd）小鼠中usp9y基因、与精子发生相关基因和信号通路关键因子的表达。结果 usp9y与Nna1可形成免疫沉淀复合物;pcd3J突变型小鼠睾丸组织中Nna1表达下调,usp9y表达量明显增高。结论二者之间存在一定的相互作用,可能共同参与小鼠的精子发生,但作用方式不明确;NF-κB细胞信号通路等可能参与了pcd小鼠的精子发生。 

【文章来源】：实用医学杂志. 2019,35(08)北大核心

【文章页数】：5 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 试剂
    1.2 磁性转染
    1.3重组载体构建
    1.4 质粒提取
    1.5 免疫共沉淀
    1.6 pcd小鼠基因型检测
    1.7 小鼠睾丸组织表达谱分析
    1.8 统计学方法
2 结果
    2.1 pCMV6-Myc-DDK-usp9y质粒的表达情况
    2.2 蛋白水平上pCMV6-Myc-DDK-usp9y质粒的表达检测
    2.3 pEGFP-usp9y- (nt1558-1955) 表达载体的构建
    2.4 重组质粒的验证
    2.5 Western Blot检测重组质粒表达
    2.6 免疫共沉淀实验检测usp9y与Nna1蛋白的相互作用
    2.7 单分子基因表达谱分析结果
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]泛素特异性加工酶2的研究进展[J]. 茅幸,张志刚,吴慧娟.  国际病理科学与临床杂志. 2012(05)



本文编号：3432974