人白细胞介素-3 cDNA的克隆及在哺乳细胞中的表达

发布时间：2021-10-16 17:05

　　白细胞介素-3（IL-3）又称多能造血因子。是由活化的T淋巴细胞产生的一种淋巴因子，它不仅在调节机体造血过程中起重要作用。而且它的产生失调可能与某些肿瘤的发生有关，因此利用基因工程手段有效表达人IL-3，必将促进基础与临床研究的进展，本研究利用PCB技术快速分离、克隆了入IL-3 cDNA，并完成了一类新型逆转录病毒IL-3表达载体的构建，在小鼠骨髓瘤细胞中成功地表达了具有完整生物活性的人IL-3，为进一步研究造血细胞分化的机制以及探索临床应用的前景打下基础。 从人扁挑腺分离淋巴细胞，加入PHA-P、TPA培养24小时后用氯化铯密度锑度离心法分离细胞总BNA，逆转录合成第一条cDNA链做为PCB反应的模板。由全自动DNA1合成仪（ABI）分别合成两个27bp的引物，在其5’端分别包含一个限制性内切酶位点（BamHⅠ，HindⅢ），合成后的DNA引物经OPC柱纯化。应用Cetus PCB扩增体系，反应总体积为100ul，1xPCB缓冲液，200uM的dNTP（dATP，dCTP，dGTP，dTTP），适当调节两个引物的反应浓度，2.5u Tag DNA聚合酶。反应首先在94℃变性2... 

【文章来源】：北京协和医学院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章页数】：53 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
一、中文摘要
二、英文摘要
三、综述
四、前言
五、实验材料
六、实验方法
七、结果
八、讨论
九、结论
十、致谢
十一、参考文献



本文编号：3440184