猪囊尾蚴抗原基因GP50的克

发布时间：2021-10-19 09:27

　　目的：从猪囊尾蚴cDNA中扩增出GP50编码基因，亚克隆至真核表达载体，利用所得的重组蛋白，为建立一种灵敏检测猪囊尾蚴感染的实验方法作准备。方法：设计并合成引物，从猪囊尾蚴cDNA文库中PCR扩增GP50编码基因，通过与线性克隆载体pGEM-T连接，经酶切和PCR鉴定及DNA测序证实后，将目的基因亚克隆入双表达载体pBK-CMV，将获得的pBK-CMV-GP50阳性重组子转化宿主菌E．coli BL21，IPTG诱导表达，Western blot鉴定。结果：PCR法扩增出了一897bp左右的DNA片断，将重组质粒pGEM-T-GP50、pBK-CMV-GP50分别作BamH Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切，均能得到一个大小与PCR扩增产物一致的插入片断，对插入片断的测序结果表明，GP50具有一个长度为897bp的完整开放阅读框（ORF），编码298个氨基酸，理论分子量33kDa，与GenBank收录（编号为AY212945）的猪囊尾蚴GP50基因具有高度的同源性（99％）。表明GP50基因的克隆和亚克隆均获成功，用IPTG诱导带有重组质粒pBK-CMV-GP50的大肠杆菌，产物行SDS-PAGE... 

【文章来源】：安徽医科大学安徽省

【文章页数】：47 页

【学位级别】：硕士

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正文
    1 前言
    2 材料与方法
    3 结果
    4 讨论
    5 结论
    6 参考文献
附录
    个人简介
致谢
综述


【参考文献】：
期刊论文
[1]猪带绦虫抗原基因TS76的克隆及原核表达[J]. 沈斌,高荣,孟民杰,沈翼,武梅,李江凌,龙章富,魏竹波,王克非,朱锦,付玉梅,卓麟,何绍江,刘世贵.  中国人兽共患病杂志. 2002(02)
[2]猪囊尾蚴特异抗原的基因克隆和表达[J]. 陈颖,刘森,薛海筹,李浩,张永红,裘丽姝.  中国血吸虫病防治杂志. 2000(05)
[3]整合素与信号转导[J]. 刘永全.  国外医学(免疫学分册). 2000(01)
[4]猪囊尾蚴重组体的培养及其诱导表达[J]. 王敏,徐之杰,李雅杰,王光岳,孙树汉,郭瀛军.  哈尔滨医科大学学报. 1998(01)
[5]囊虫病诊断用抗原编码cDNA的分子克隆[J]. 孙树汉,王俊霞,陈蕊雯,陆惠萍,彭郁葱,王朝霞.  中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 1997(01)
[6]膜蛋白的糖脂锚及其临床[J]. 刘新月.  武汉医学杂志. 1996(01)
[7]应用生物素—亲和素系统诊断脑囊虫病的研究[J]. 赵瑞,崔学良,胡忠义.  中国寄生虫病防治杂志. 1990(02)



本文编号：3444603