应用噬菌体展示技术（Phage Display）对碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）抗原决定簇的研究

发布时间：2021-10-31 17:52

　　目的：找出在随机七肽库中能与中和bFGF活性的抗体-GF22结合的保守序列，在bFGF分子上找出该抗原决定簇的位点，分析其序列，结构与功能的关系。同时检验这种抗原决定簇是否能作为一种免疫抗原诱发机体产生能与BFGF结合的抗体，以及该抗原决定簇是否直接结合到bFGF受体上，从而探讨短肽作为肿瘤疫苗和肿瘤特异定位标志的应用前景。 方法：以能中和bFGF活性的抗体GF22作为目标（target），用随机七肽噬菌体库进行筛选，经三次筛选后用点杂交进行阳性克隆鉴定，用竞争ElISA分析不同克隆对GF22的亲和性。用不同噬菌体克隆免疫小鼠，分析不同克隆诱导小鼠产生抗-bFGF抗体的能力。把不同性质的克隆测序，找出及分析其保守序列和其可能的结构。应用细胞免疫组化方法检测若干含有保守序列的噬菌体克隆能否结合在已知表达BFGF受体的细胞NIH3T3上。 结果：经三轮筛选后阳性率达到90％，都能特异性地抑制bFGF结合到GF22上；测序结果显示序列LP（P/L）GH（F/I）K高度保守，同源性分析显示序列PPGHFK与bFGF分子22-27位氨基酸相同，而H（F/I）K则与bFGF分子的59-... 

【文章来源】：暨南大学广东省 211工程院校

【文章页数】：110 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
英文摘要
前言
    噬菌体展示技术的特点及优势
    bFGF的结构及生物学特点
    用噬菌体展示技术对bFGF进行抗原决定簇定位的意义
    研究的目的和方向
实验所需器材与试剂
实验设计及步骤
    噬菌体库的筛选
    点杂交-阳性克隆的鉴定
    竞争ELISA
    检验短肽的免疫原性
    测序
    细胞免疫组化
实验结果及分析
    噬菌体库的筛选
    点杂交-阳性克隆的鉴定
    竞争ELISA
    检验短肽的免疫原性
    测序
    细胞免疫组化
讨论
    bFGF的杭原决定簇
    抗原决定簇的免疫原性
    抗原决定簇与受体结合位点的关系
    存在问题及研究展望
总结
    实验结果
    结论
参考文献
鸣谢
已发表文章
附录
    ProParam
    SYFPETHI
    Amino Acid Hydrophobicity Index
    Sequencing result
    Charaterization of bFGF，bFGF signaing pathway and strategies for drug discovery



本文编号：3468586