利用荧光共振能量转移技术研究TGF-β/Smad3信号转导通路

发布时间：2021-11-02 00:53

　　转移生长因子-β1（TGF-β1）/Smad3信号转导通路与人类的多种生理病理发生机制相关,但是该信号通路中Smad3被磷酸化的时空信息仍然不完全清楚。为了动态观察活细胞生理状态下Smad3被磷酸化的过程,首先进行ECFP-Smad3-Citrine（Smad3biosensor）融合蛋白表达载体的构建及鉴定;然后转染293T细胞并观察转染效率和融合蛋白表达情况。在荧光显微镜下,应用MetaFlour FRET 4.6软件测量TGF-β1刺激293T细胞前后Smad3biosensor的荧光能量共振转移（FRET）的变化情况。结果显示,Smad3biosensor转染效率达40%,融合蛋白表达成功。TGF-β1刺激293T细胞10min后,监测到胞质内FRET值逐渐减小,青色荧光蛋白（CFP）减弱,黄色荧光蛋白变体（Citrine）增强,历时约300s后逐渐恢复。应用FRET技术能使我们在活细胞生理状态下,实时动态监测TGF-β1/Smad3信号转导通路的过程。 

【文章来源】：生物医学工程学杂志. 2014,31(05)北大核心CSCD

【文章页数】：5 页

【文章目录】：
引言
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 质粒、菌株和细胞
        1.1.2 试剂
        1.1.3 荧光成像系统
    1.2 ECFP-Smad3-Citrine融合蛋白表达载体的构建及表达鉴定
    1.3 细胞培养和转染
    1.4 荧光成像及FRET检测
        1.4.1 校正因子计算
        1.4.2 FRET检测
2 结果
    2.1 Smad3biosensor的表达、FRET值检测及计算
    2.2 TGF-β1诱导Smad3融合蛋白的动力学研究
3 讨论



本文编号：3471020