嵌合HAdV六邻体蛋白抗原表位的rFLU/HAdV/Hexon疫苗候选株构建及免疫效果研究
发布时间：2021-11-07 22:57
目的构建、拯救以PR8流感病毒为载体嵌合HAdV六邻体蛋白抗原表位的疫苗候选株,对其免疫原性及免疫保护性进行评价。方法应用反向遗传学技术,以流感病毒PR8为载体,将HAdV六邻体蛋白抗原表位的基因插入流感病毒非结构蛋白NS基因,构建重组质粒NS1-Hexon,将重组质粒与PR8流感病毒其他7个基因组质粒共转染COS-1/MDCK共培养细胞,成功拯救嵌合HAdV六邻体抗原表位重组疫苗候选株,命名为rFLU/HAdV/Hexon,通过HA、RT-PCR、IFA、Western blotting和电镜等方法对rFLU/HAdV/Hexon进行鉴定。rFLU/HAdV/Hexon经鸡胚培养、浓缩纯化后滴鼻免疫Balb/c小鼠,评价小鼠机体产生的体液免疫、细胞免疫和黏膜免疫应答,进一步采用PR8流感病毒和HAdV-3病毒攻击小鼠评价其免疫保护性。结果成功拯救出基于PR8流感病毒为载体嵌合HAdV六邻体蛋白抗原表位的rFLU/HAdV/Hexon疫苗候选株。rFLU/HAdV/Hexon疫苗株形态符合流感病毒典型特征,能够诱导小鼠机体产生高效价的针对PR8和HAdV-3的特异性抗体,肺鼻灌洗液可检...
【文章来源】：免疫学杂志. 2014,30(05)北大核心CSCD
【文章页数】：7 页
【部分图文】：
小鼠免疫rFLU/HAdV/Hexon的中和效价Fig2Neutralizingantibodytitersofmiceimmunizedwiththe
伪敲庖?Balb/c小鼠二免10d，PR8感染Balb/c小鼠。结果显示rFLU/HAdV/Hexon实验组小鼠体质量变化不明显（图6a），无死亡（图6b），肺、鼻病毒载量显著降低（图6c）。PBS组小鼠体质量下降明显，最终死亡，肺、鼻均检测到相对较高的病毒载量。说明重组rFLU/HAdV/Hexon疫苗株对小鼠PR8感染具有较好的免疫保护效果。3讨论HAdV是引起呼吸道感染的重要病毒病原之一，在儿童可引起严重的下呼吸道感染，近年来研究表明a）IgGtitersagainstHAdV-3；b)IgG1titersagainstHAdV-3;c)IgG2atitersagainstHAdV-3.*P<0.05，**P<0.01.图3小鼠免疫rFLU/HAdV/Hexon产生针对HAdV-3的血清抗体效价Fig3SerumantibodytitersofmiceimmunizedwiththerecombinantvirusesrFLU/HAdV/Hexona)sIgAtitersagainstHAdVinlunglavage;b)sIgAtitersagainstHAdVinnasallavage.*P<0.05，**P<0.01.图4小鼠免疫rFLU/HAdV/Hexon产生针对HAdV-3的黏膜抗体效价Fig4MucosalantibodytitersofmiceimmunizedwiththerecombinantvirusesrFLU/HAdV/HexonHAdV-3challengeofvaccinatedmice.a)Normal,104TCID50,105TCID50,andPBSmicepathologicalexaminationwereperformedbyH&Estainingoflungtissues;b)virusreplicationofHAdV-3inlungtissueweremeasuredbyqPCR.*P<0.05,vsPBS.图5rFLU/HAdV/Hexon免疫小鼠对腺病毒攻击的免疫保护效果Fig5ProtectiveefficiacyofrFLU/HAdV/HexoninBalb/cmiceafterchallengedwithHAdV-3·379·
说明重组rFLU/HAdV/Hexon疫苗株对小鼠PR8感染具有较好的免疫保护效果。3讨论HAdV是引起呼吸道感染的重要病毒病原之一，在儿童可引起严重的下呼吸道感染，近年来研究表明a）IgGtitersagainstHAdV-3；b)IgG1titersagainstHAdV-3;c)IgG2atitersagainstHAdV-3.*P<0.05，**P<0.01.图3小鼠免疫rFLU/HAdV/Hexon产生针对HAdV-3的血清抗体效价Fig3SerumantibodytitersofmiceimmunizedwiththerecombinantvirusesrFLU/HAdV/Hexona)sIgAtitersagainstHAdVinlunglavage;b)sIgAtitersagainstHAdVinnasallavage.*P<0.05，**P<0.01.图4小鼠免疫rFLU/HAdV/Hexon产生针对HAdV-3的黏膜抗体效价Fig4MucosalantibodytitersofmiceimmunizedwiththerecombinantvirusesrFLU/HAdV/HexonHAdV-3challengeofvaccinatedmice.a)Normal,104TCID50,105TCID50,andPBSmicepathologicalexaminationwereperformedbyH&Estainingoflungtissues;b)virusreplicationofHAdV-3inlungtissueweremeasuredbyqPCR.*P<0.05,vsPBS.图5rFLU/HAdV/Hexon免疫小鼠对腺病毒攻击的免疫保护效果Fig5ProtectiveefficiacyofrFLU/HAdV/HexoninBalb/cmiceafterchallengedwithHAdV-3·379·
【参考文献】：
期刊论文
[1]重组嵌合表达G蛋白中和表位的流感病毒载体RSV疫苗构建和免疫保护效果[J]. 卞成蓉,刘娜,邢丽,段跃强,王希良,周娅,杨鹏辉. 免疫学杂志. 2013(05)
本文编号：3482547
【文章来源】：免疫学杂志. 2014,30(05)北大核心CSCD
【文章页数】：7 页
【部分图文】：
小鼠免疫rFLU/HAdV/Hexon的中和效价Fig2Neutralizingantibodytitersofmiceimmunizedwiththe
伪敲庖?Balb/c小鼠二免10d，PR8感染Balb/c小鼠。结果显示rFLU/HAdV/Hexon实验组小鼠体质量变化不明显（图6a），无死亡（图6b），肺、鼻病毒载量显著降低（图6c）。PBS组小鼠体质量下降明显，最终死亡，肺、鼻均检测到相对较高的病毒载量。说明重组rFLU/HAdV/Hexon疫苗株对小鼠PR8感染具有较好的免疫保护效果。3讨论HAdV是引起呼吸道感染的重要病毒病原之一，在儿童可引起严重的下呼吸道感染，近年来研究表明a）IgGtitersagainstHAdV-3；b)IgG1titersagainstHAdV-3;c)IgG2atitersagainstHAdV-3.*P<0.05，**P<0.01.图3小鼠免疫rFLU/HAdV/Hexon产生针对HAdV-3的血清抗体效价Fig3SerumantibodytitersofmiceimmunizedwiththerecombinantvirusesrFLU/HAdV/Hexona)sIgAtitersagainstHAdVinlunglavage;b)sIgAtitersagainstHAdVinnasallavage.*P<0.05，**P<0.01.图4小鼠免疫rFLU/HAdV/Hexon产生针对HAdV-3的黏膜抗体效价Fig4MucosalantibodytitersofmiceimmunizedwiththerecombinantvirusesrFLU/HAdV/HexonHAdV-3challengeofvaccinatedmice.a)Normal,104TCID50,105TCID50,andPBSmicepathologicalexaminationwereperformedbyH&Estainingoflungtissues;b)virusreplicationofHAdV-3inlungtissueweremeasuredbyqPCR.*P<0.05,vsPBS.图5rFLU/HAdV/Hexon免疫小鼠对腺病毒攻击的免疫保护效果Fig5ProtectiveefficiacyofrFLU/HAdV/HexoninBalb/cmiceafterchallengedwithHAdV-3·379·
说明重组rFLU/HAdV/Hexon疫苗株对小鼠PR8感染具有较好的免疫保护效果。3讨论HAdV是引起呼吸道感染的重要病毒病原之一，在儿童可引起严重的下呼吸道感染，近年来研究表明a）IgGtitersagainstHAdV-3；b)IgG1titersagainstHAdV-3;c)IgG2atitersagainstHAdV-3.*P<0.05，**P<0.01.图3小鼠免疫rFLU/HAdV/Hexon产生针对HAdV-3的血清抗体效价Fig3SerumantibodytitersofmiceimmunizedwiththerecombinantvirusesrFLU/HAdV/Hexona)sIgAtitersagainstHAdVinlunglavage;b)sIgAtitersagainstHAdVinnasallavage.*P<0.05，**P<0.01.图4小鼠免疫rFLU/HAdV/Hexon产生针对HAdV-3的黏膜抗体效价Fig4MucosalantibodytitersofmiceimmunizedwiththerecombinantvirusesrFLU/HAdV/HexonHAdV-3challengeofvaccinatedmice.a)Normal,104TCID50,105TCID50,andPBSmicepathologicalexaminationwereperformedbyH&Estainingoflungtissues;b)virusreplicationofHAdV-3inlungtissueweremeasuredbyqPCR.*P<0.05,vsPBS.图5rFLU/HAdV/Hexon免疫小鼠对腺病毒攻击的免疫保护效果Fig5ProtectiveefficiacyofrFLU/HAdV/HexoninBalb/cmiceafterchallengedwithHAdV-3·379·
【参考文献】：
期刊论文
[1]重组嵌合表达G蛋白中和表位的流感病毒载体RSV疫苗构建和免疫保护效果[J]. 卞成蓉,刘娜,邢丽,段跃强,王希良,周娅,杨鹏辉. 免疫学杂志. 2013(05)
本文编号：3482547
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