乙肝病毒表面抗原preS2/S基因的修饰及在Pichia Pastoris系统的分泌表达

发布时间：2021-11-15 06:04

　　拟获得乙肝病毒表面抗原preS2/S在Pichia Pastoris酵母中的稳定分泌表达。首先利用毕赤酵母偏爱密码子对adr亚型preS2/S基因进行修饰。然后分别将preS2/S基因与修饰后的preS2/S基因重组到酵母分泌型表达载体（pPICZαB）上,形成重组质粒,电转GS115酵母细胞,分别得到208个重组子,经过PCR筛选、摇瓶发酵筛选及酶联免疫法（ELISA）检测,获得了整合的阳性克隆,得到稳定表达的菌株。野生型preS2/S重组子的S抗原ELISA检测结果中阳性率为80.6%,修饰型preS2/S重组子的S抗原ELISA检测结果中阳性率为96.8%。将鉴定的阳性克隆菌株modpreS2/S 23发酵诱导表达后,发酵上清液经SDS-PAGE电泳,有特异蛋白条带,表达产物单体分子量为32,000Da左右,且在第四天表达量较高。纯化发酵上清液,可获得预期大小的乙肝病毒表面抗原中蛋白（middle protein, MP）,经ELISA检测S抗原呈强阳性,preS2抗原呈弱阳性。以上结果表明,preS2/S基因在毕赤酵母表达系统中获得了稳定分泌表达。 

【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

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HBV颗粒形态图

图1.2 HBV在细胞内的复制过程.1.4 HBV的分布与传播途径世界各地的 HBV 感染率相差很多,提示宿主的遗传背景不同可能影响 HB感染性。在对亚洲，非洲和拉丁美洲等乙肝高发地区进行的流行病学调查结表明，慢性乙肝有明显的种族倾向性和家族聚集性。宿主的遗传因素(如MH多态性)可能也会影响乙肝的转归。HBV存在于乙肝病人的血液、汗液、唾液、月经、乳汁及泪液等分泌物中乙肝急性期和慢性肝炎急性发作期时病人的上述体液及分泌物接触后，HB入血液中即可传染上乙肝。HBV 进入血液的主要途径： ①母婴垂直传播：国现有 HBsAg 阳性者约 1.4 亿人，其中 85％通过母婴传播。垂直传播是我乙肝蔓延和高发的主要原因。也有少数为父婴传播者。母婴传播主要是通过

图1.3 HBV基因组图BV S区的基因结构子最外层为S和preS基因编码的大蛋白、中蛋白和小蛋白形成包膜。里面是核心抗原蛋白形成的核衣壳，包裹着基因组长约3.2kb，两条链长度不同，其长链又称 L(-链又称S(+)链，长度不固定，为长链的50～100％。S区又preS2基因3段，它们读码框相位相同，连续串连排列并，分别编码226个氨基酸的S蛋白、108～119个氨基酸的酸的preS2蛋白。其中S蛋白称为主要蛋白或小)，是HBsAg的主要成分，preS2+S蛋白称为中蛋白(mid+preS2+S 蛋白称为大蛋白(large protein, LP)[8]（见


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