钩端螺旋体溶血素生物功能的研究以及脂酶水解活性的探究

发布时间：2021-11-17 06:30

　　问号钩端螺旋体黄疸出血群赖型赖株的全基因组测序工作已经完成，在基因诠释的基础上，预测出几个可能具有溶血活性的蛋白，对它们进行克隆、表达和溶血活性的初步研究。本实验主要研究问号钩端螺旋体溶血素LA3937和LA1029的溶血机理和细胞毒性，进一步探讨问号钩端螺旋体的致病机理。我们分别从细胞水平、亚细胞水平、分子水平以及整体动物水平考察了溶血素的生物功能。 细胞水平：使用倒置显微镜，直接观察活体培养细胞的变化。亚细胞水平：使用透射电子显微镜、扫描电子显微镜、荧光共聚焦显微镜，观察溶血素作用细胞后，细胞膜、细胞器、细胞核、细胞表面形态以及细胞骨架等的变化，探讨溶血素的作用机制和致病机理。分子水平：A．分子水平的考察中，细胞因子产生量的变化是很重要的方面。细胞因子具有非常广泛的生物学活性，促进靶细胞的增殖和分化，增强抗感染和细胞杀伤效应，促进或抑制其它细胞因子和膜表面分子的表达，促进炎症过程以及影响细胞代谢等。B．细胞在外界因子的作用下，细胞周期内很多分子都会发生变化。细胞程序性死亡是细胞在外界因子，如毒素，的作用下可能发生的一种很重要的生理、病理变化，通过流氏细胞仪检测细胞凋亡情况。C... 

【文章来源】：沈阳药科大学辽宁省

【文章页数】：111 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
ABSTRACT
引言
第一章 钩端螺旋体溶血素生物功能的研究
    第一节 钩端螺旋体溶血素的特性分析
        1 材料和方法
        2 结果和讨论
            2.1 钩端螺旋体溶血素LA3937和LA1029的结构域
            2.2 钩端螺旋体溶血素LA3937和LA1029的跨膜结构
            2.3 钩端螺旋体溶血素LA3937和LA1029的相似性分析
            2.4 钩端螺旋体溶血素LA3937的二级结构
        3 小结
    第二节 钩端螺旋体溶血素溶血活性的影响因素
        1 实验材料
        2 实验方法
        3 结果和讨论
            3.1 溶血素LA3937和LA1029的表达验证及纯化结果
            3.2 钩端螺旋体溶血素LA3937溶血活性影响因子
            3.3 钩端螺旋体溶血素LA1029溶血活性影响因子
            3.4 溶血素LA3937和LA1029作用绵羊红细胞透射电子显微镜观察
        4 小结
    第三节 钩端螺旋体溶血素对宿主免疫细胞的作用
        1 实验材料
        2 实验方法
        3 结果和讨论
            3.1 倒置光学显微镜观察BALB／C小鼠免疫细胞的变化情况
            3.2 透射电镜观察BALB／C小鼠淋巴细胞亚显微结构的变化
            3.3 荧光共聚焦电镜观察BALB／C小鼠免疫细胞细胞骨架的变化
            3.4 扫描电镜观察巨噬细胞细胞表面结构的变化
            3.5 溶血素作用小鼠淋巴和巨噬细胞引起细胞因子产生水平的变化
        4 小结
    第四节 钩端螺旋体溶血素对宿主组织细胞的作用
        1 实验材料
        2 实验方法
        3 结果和讨论
            3.1 倒置光学显微镜观察人组织细胞的变化
            3.2 透射电镜观察人组织细胞内部的亚显微水平的变化
            3.3 流氏细胞仪观察细胞凋亡现象
            3.4 溶血素LA3937引起人组织细胞细胞因子产生水平的变化
        4 小结
    第五节 钩端螺旋体溶血素LA3937作用人肝L-02细胞引起细胞表达谱的变化以及荧光定量PCR的检验分析
        1 实验材料
        2 实验方法
        3 结果和讨论
            3.1 基因芯片质控分析
            3.2 人肝L-02细胞表达谱的变化
            3.3 荧光定量PCR检测宿主细胞的表达谱中部分基因的变化
        4 小结
    第六节 钩端螺旋体溶血素LA3937静脉注射昆明小鼠引起组织器官以及血液学指标的变化
        1 实验材料
        2 实验方法
        3 结果与讨论
            3.1 肉眼直接观察肝、肾、肺的变化
            3.2 HE染色检测肺出血情况
            3.3 溶血素LA3937静脉注射昆明小鼠引起血液学指标的变化
        4 小结
第二章 钩端螺旋体脂酶水解活性的探究
    第一节 钩端螺旋体脂酶的特性分析
        1 材料和方法
        2 结果和讨论
            2.1 钩端螺旋体溶血素LA0399的结构域
            2.2 钩端螺旋体溶血素LA0399的跨膜结构
            2.3 钩端螺旋体溶血素LA0399的进化树分析
        3 小结
    第二节 脂酶的克隆、表达和水解活性探究
        1 实验材料
        2 实验方法
        3 结果和讨论
            3.1 钩端螺旋体脂酶基因的克隆、表达和验证
            3.2 纯化脂酶蛋白的定量
            3.3 钩端螺旋体脂酶水解活性的检测
        4 小结
结论
参考文献
致谢



本文编号：3500382