稳定表达TRPA1通道的HEK-293T细胞模型的建立

发布时间：2021-11-21 00:08

　　目的建立稳定表达TRPA1的HEK-293T细胞模型,并鉴定模型构建是否成功。方法构建TRPA1真核表达质粒,采用脂质体转染法将其转入HEK-293T细胞中,经G418筛选稳定表达株,采用RT-PCR、免疫组化技术,检测HEK-293T细胞TRPA1基因的转录和蛋白的表达。结果经酶切、测序证明,TRPA1基因的真核重组表达质粒已成功构建;PCR、免疫组化检测结果表明,将此重组质粒转入HEK-293T细胞可稳定表达TRPA1基因。结论成功构建了能稳定表达TRPA1通道的HEK-293T细胞株,为体外研究TRPA1生理病理功能和筛选相关TRPA1通道调节剂奠定了基础。 

【文章来源】：中国药理学通报. 2019,35(03)北大核心CSCD

【文章页数】：4 页

【文章目录】：
1 材料
    1.1 细胞、菌株及试剂
    1.2 仪器
2 方法
    2.1 TRPA1基因的扩增及克隆
    2.2 TRPA1基因真核表达质粒的构建及鉴定
    2.3 脂质体介导质粒转染HEK-293T细胞
    2.4 转染细胞TRPA1基因转录和蛋白表达的检测
        2.4.1 RT-PCR检测基因的转录
        2.4.2 免疫组化检测蛋白的表达
3 结果
    3.1 TRPA1基因的RT-PCR扩增
    3.2 T-easy-1.9和T-easy-1.5重组克隆质粒的酶切鉴定与测序
    3.3 TRPA1真核重组表达质粒的酶切鉴定
    3.4 TRPA1基因转录和蛋白表达的RT-PCR及免疫组化检测结果
4 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]大鼠背根神经节细胞中TRPV1与cAMP/PKA通路调控机制研究[J]. 高峰,卢伟龙,王华林,吴媛媛,王斌,李敏.  中国药理学通报. 2018(08)
[2]TRP通道与偏头痛[J]. 王胜兰,戴毅,刘晓丽,张文生.  中国药理学通报. 2013(10)



本文编号：3508359