宿主细胞中戊型肝炎病毒衣壳结合蛋白的筛选及Grp78/Bip介导病毒入胞的初步研究

发布时间：2021-11-22 22:01

　　戊型肝炎病毒（HEV）为无包膜正二十面体单链正义RNA病毒,主要经粪口途径传播,往往在发展中国家造成爆发流行,在发达国家导致散发流行。戊型肝炎的病死率为0.2-4%,孕妇病死率则高达10-20%,且越来越多的证据表明其可能是一种人兽共患病,给人类身体健康造成极大的危害。HEV由于一直缺乏稳定有效的细胞感染模型,其感染入胞机制及其致病机理至今仍不清楚。本论文利用能较好模拟HEV表面结构的HEV衣壳蛋白片段p239为模型,构建p239相互作用蛋白筛选平台,筛选可能参与HEV入胞过程的宿主细胞蛋白,为揭示HEV感染入胞机制提供线索。p239为HEV pORF2（aa368-606）片段,原核表达能自组装成15-30nm的蛋白颗粒,与戊型肝炎患者急性期血清反应性良好,免疫恒河猴可以完全预防HEV导致的戊型肝炎。p239孵育HepG2细胞,能特异性的吸附并侵入细胞,且被p239中和单抗8C11阻断。p239与野生1型HEV共孵育细胞,能阻断HEV感染HepG2和人原代肝细胞,表明p239能较好模拟HEV表面结构。利用p239较好模拟HEV表面结构的特性,将其作为蛋白亲合层析的配体/诱饵蛋白,借助... 

【文章来源】：厦门大学福建省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：117 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

HEV流行分布图

前言获得猪HEV野毒株，并发现其碱基序列与此前公布的两个美国戊肝患EV株同源性高达92％。近年来，越来越多的资料表明，HEV或与其相不仅分布于人类中，亦广泛分布于多种动物体内，且发现不同物种之叉感染（如猪HEV成功感染恒河猴与黑猩猩[6]，食用未经煮熟的携带或猪肝能引起戊型肝炎[7-10]，这些都提示戊型肝炎可能是一种人兽共

孕妇易感性高，重症者较多，且早产、死胎率高。戊肝总病死率与甲肝相似或稍高，为 0.2-4%，但孕妇戊肝的病死率高达 10-20％，其机制尚未阐明[13-15]。所以，HEV已经严重危害了人类的身体健康。2. HEV 基因组HEV基因组为单股正链RNA，大小约为 7.2knt，包含三个开放读码框架（ORF）[16]。5’端有m7G的帽子，之后为 28nt的非编码区（NCR），3’端有PolyA尾，之前同样存在 68nt的非编码序列。ORF1（nt28－5109）主要编码病毒的非结构蛋白，例如甲基转移酶，RNA依赖的RNA合成酶等；ORF2（nt5147-7127）主要编码病毒的结构蛋白；ORF3 基因大小为 369nt，编码一 123aa的短肽，其具体的生物学功能仍未阐明。HEV 1－3 型以及 4 型基因组见图 3

【参考文献】：
期刊论文
[1]戊型肝炎病毒细胞吸附模型的建立及病毒吸附区域初步研究[J]. 何水珍,郑子峥,吴婷,谢明辉,苗季,张军,夏宁邵.  病毒学报. 2006(06)
[2]HepG2细胞中与戊型肝炎病毒衣壳蛋白相互作用蛋白的初步研究[J]. 吴小成,何水珍,郑子峥,孙媛媛,张军,夏宁邵.  病毒学报. 2006(05)
[3]戊型肝炎病毒衣壳蛋白中和表位间的构象诱导[J]. 张军,顾颖,欧山海,王颖彬,叶祥忠,林鉴,葛胜祥,夏宁邵.  病毒学报. 2004(02)
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[5]颗粒化重组戊型肝炎病毒衣壳蛋白及其抗原性与免疫原性[J]. 何志强,张军,李少伟,林鉴,刘如石,陈毅歆,王颖彬,夏宁邵.  生物工程学报. 2004(02)
[6]戊型肝炎是否为人兽共患病的讨论[J]. 郑英杰,张军,夏宁邵.  中国人兽共患病杂志. 2003(06)
[7]戊型肝炎病毒中和性单克隆抗体的鉴定[J]. 顾颖,葛胜祥,黄果勇,李少伟,朱子恒,何志强,陈毅歆,王颖彬,张军,夏宁邵.  病毒学报. 2003(03)
[8]生物传感器对抗戊型肝炎病毒单克隆抗体部分特性的研究[J]. 顾颖,张军,李少伟,葛胜祥,何志强,朱子恒,鲜阳凌,李益民,夏宁邵.  细胞与分子免疫学杂志. 2002(06)
[9]大肠杆菌表达的戊型肝炎病毒ORF2片段的聚合现象研究[J]. 李少伟,张军,何志强,葛胜祥,顾颖,林鉴,刘如石,夏宁邵.  生物工程学报. 2002(04)
[10]一种带增强子的原核高效表达载体的构建及初步应用[J]. 罗文新,张军,杨海杰,李少伟,谢小燕,逄淑强,李少菁,夏宁邵.  生物工程学报. 2000(05)



本文编号：3512515