Nm23-H1cDNA片段克隆及腺病毒载体的构建

发布时间：2021-11-23 07:08

　　【目的】从正常人肝组织中克隆nm23-H1cDNA基因，构建腺病毒载体，为研究nm23-H1的生物学活性、突变特性及肿瘤基因治疗打下实验基础。 【方法】应用逆转录多聚酶链式反应（RT-PCR）技术，从正常人肝组织中扩增出nm23-H1cDNA，并将其连接到质粒pMD18-T上，经酶切鉴定、核苷酸序列测定，设计突变引物，进行PCR重叠延伸点诱导突变，克隆基因序列在Genbank上比较。与腺病毒穿梭质粒正向连接，构建腺病毒载体。 【结果】在正常人肝组织中克隆得到的nm23-H1cDNA片段经测序、比较，发现两个核苷酸与已知基因序列不同：213位胞嘧啶突变为胸腺嘧啶（213C→T），217位胞嘧啶突变为胸腺嘧啶（217C→T）。对应氨基酸发生突变：71位G甘氨酸变为A丙氨酸，73位的V缬氨酸变为I异亮氨酸。作PCR重叠延伸点诱导突变，克隆的基因经测序鉴定，与已知nm23-H1cDNA编码区基因100％符合，以此基因成功构建正向腺病毒穿梭质粒载体。 【结论】1．成功克隆出中国人nm23-H1cDNA基因，测序结果在基因库中比较，有两个核苷酸不同，无类似报道。2．采用PCR重叠... 

【文章来源】：昆明医科大学云南省

【文章页数】：65 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
一、 论文 Nm23-H1cDNA片段克隆及腺病毒载体的构建
    (一) 中文摘要
    (二) 英文摘要
    (三) 正文
        1 前言
        2 材料和方法
        3 结果
        4 讨论
        5 结论
        6 参考文献
    (四) 中文详细摘要
    (五) 英文详细摘要
二、 综述
三、 致谢
四、 发表文章目录


【参考文献】：
期刊论文
[1]nm23-h1基因导入对腺样囊性癌分化的影响[J]. 温玉明,李文,王昌美,李龙江,杨湛,陈亚多.  临床口腔医学杂志. 2001(03)
[2]口腔鳞癌nm23-H1基因存在状态和颈淋巴结转移的关系[J]. 刘刚,李金荣,东耀峻.  实用口腔医学杂志. 2001(01)
[3]口腔鳞癌组织中nm23-H1基因的mRNA表达及临床意义[J]. 张韬,杜德顺,赖钦声,赵玉霞,柴京.  现代口腔医学杂志. 1999(02)
[4]与肿瘤转移抑制基因nm23高度同源的nm23－H3b基因的克隆和[J]. 江贤鹏,刘康达,周信达,汤钊猷,张志芳,张颖,吴祥甫.  中华医学杂志. 1994(11)



本文编号：3513378