小鼠视网膜干细胞的分离与诱导分化

发布时间：2021-11-29 02:45

　　鱼类及两栖类动物的视网膜睫状缘区（CMZ）存在视网膜干细胞，在视网膜损伤时，视网膜内有增殖潜能的细胞可快速增殖、分化以修复更新受损细胞。近年来，随着神经干细胞研究的不断深入，国外部分学者开始尝试哺乳动物视网膜干细胞的分离探索工作。研究资料显示，这些在进化上较高级的动物也存在着一个与鱼类及两栖类的CMZ区（睫状缘区）相似的区域，国内在视网膜干细胞的研究方面尚未见文献报道。目的：研究视网膜干细胞的分离、体外培养方法与增殖、分化规律，以期为视网膜疾病的研究提供基础性资料。方法：（1）应用细胞培养技术，在不同有丝分裂原（bFGF、EGF、胰岛素）作用下，比较胎龄17天昆明小鼠眼的睫状体部（CMZ）、视网膜色素部（RPE）、视网膜神经部（NR）以及虹膜部体外培养细胞的特点，确定视网膜干细胞的存在部位；（2）通过免疫细胞化学及免疫荧光方法研究视网膜干细胞的增殖及分化特性；（3）体外应用VEGF定向诱导视网膜干细胞向感光细胞分化。结果：（1）来自CMZ区的培养细胞，在特定外源性有丝分裂原作用下，可形成悬浮生长的细胞团，经多次传代，细胞增殖能力未见衰减。BrdU标记结果显示增殖的大部分细胞为BrdU阳... 

【文章来源】：中国人民解放军陆军军医大学重庆市

【文章页数】：41 页

【学位级别】：硕士

【图文】：

培养细胞的形态观察^，分裂中的堪养细胞哎x20》8E培养中的瓜浮细胞Sx峋C}第8代的培界绷脚团你1劫

血清诱导分化后GFAp免疫反应阳性细胞}c法)

6. VEGF 的定向诱导作用6.1 培养细胞的观察6.1.1 VEGF 组 培养 12h 细胞贴壁，部分细胞有突起伸出。7d 后，多数细胞贴壁生长，分布均匀，折光性好，形态多样，大部分细胞突起较短。可见少量悬浮细胞团，折光性较差，多为已凋亡的细胞。瓶底有较多死亡细胞及细胞碎片。6.1.2 非 VEGF 组 培养 2h 可见部分细胞贴壁。7d 后，细胞贴壁生长良好，分布较均匀。6.2 荧光显微镜下观察6.2.1 实验组 VEGF 作用组镜下可见散落的呈明显红色荧光的抗 Opsin 阳性细胞，阳性细胞胞体明显，突起不明显(图 9 A)。非 VEGF 组阳性细胞数量较少(图 9 B)，多数视野细胞数为 0。6.2.2 空白对照组 未见阳性细胞。6.3 VEGF 组与非 VEGF 组诱导生成感光细胞的比较 见图 9、表 2。


本文编号：3525682