人羊膜上皮细胞的体外培养及诱导分化

发布时间：2021-12-02 10:42

　　人羊膜上皮细胞由外胚层发育而来,属于成体干细胞,具有来源广泛、免疫原性低、非致瘤性、不存在医学伦理道德限制等优点.研究目的:建立人羊膜上皮细胞的体外分离培养的方法,检测其向三胚层诱导分化培养潜能.在无菌条件下机械分离羊膜,使用胰蛋白酶分步消化法收集人羊膜上皮细胞,体外培养,观察其细胞形态与生长规律;并通过免疫细胞化学法,RTPCR及三胚层定向诱导等方法对其进行鉴定.结果:成功从人羊膜中分离得到纯度较高的人羊膜上皮细胞.免疫细胞化学法鉴定结果显示,分离到的羊膜上皮细胞内的角蛋白19呈阳性;RT-PCR鉴定干细胞标志基因REX1、Oct-4和Nanog,在mRNA水平均有表达;定向诱导条件下,人羊膜上皮细胞可向成脂、成神经和成肝样细胞分化.结论:人羊膜上皮细胞可在体外分离培养,具有干细胞特性,可以定向诱导分化成内胚层、中胚层、和三胚层三个胚层组织与细胞. 

【文章来源】：内蒙古大学学报(自然科学版). 2019,50(02)北大核心

【文章页数】：9 页

【文章目录】：
引言
1 材料与方法
    1.1 实验材料与试剂
        1.1.1 实验材料
        1.1.2 实验试剂
    1.2 实验方法
        1.2.1 人羊膜上皮细胞的分离培养
        1.2.2 人羊膜上皮细胞的传代培养
        1.2.3 人羊膜上皮细胞的生长曲线测定
        1.2.4 免疫细胞化学法检测细胞内角蛋白19
        1.2.5 人羊膜上皮细胞向成脂细胞诱导分化及鉴定
        1.2.6 人羊膜上皮细胞向成神经细胞诱导分化及鉴定培养
        1.2.7 人羊膜上皮细胞向成肝样细胞诱导分化及鉴定
        1.2.8 RT-PCR检测干细胞标志基因的表达情况
2 实验结果与分析
    2.1 人羊膜上皮细胞的形态观察
    2.2 人羊膜上皮细胞的生长曲线
    2.3 免疫细胞化学法检测角蛋白19 (CK19) 的表达
    2.4 RT-PCR检测干性基因Oct-4、Nanog和REX1的mRNA水平的表达情况
    2.5 人羊膜上皮细胞成脂诱导分化及鉴定
    2.6 人羊膜上皮细胞成神经诱导分化及鉴定
    2.7 人羊膜上皮细胞成肝样细胞诱导分化及鉴定
3 讨论
    3.1 人羊膜上皮细胞的分离培养
    3.2 人羊膜上皮细胞的生物学特性
    3.3 人羊膜上皮细胞的多向分化潜能
4 结论



本文编号：3528277