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人微小病毒B19-VP2基因真核表达质粒的构建

发布时间:2022-01-05 16:16
  研究目的:人微小病毒B19(Human Parvovirus B19)系微小病毒属中唯一能致人类疾病的一种病原体,可引起传染性红斑、再障危象等多种人类疾病。目前尚来建立针对该病毒的特异性疫苗,对人微小病毒B19感染的预防和治疗是急待解决的问题。近年来国外开始把B19的衣壳蛋白作为疫苗抗原进行研究。本课题的目的是利用真核表达质粒pcDNA3.1为载体,将选择出的B19-VP2抗原表位丰富区基因片段重组其中,构建出pcDNA3.1-VP2重组表达载体,并将重组质粒免疫动物,观察其免疫效应,以探讨人微小病毒B19-VP2基因作为基因疫苗的可行性,为最终建立针对该病毒的特异性实用疫苗奠定基础。 方法:从人微小病毒B19的基因序列和结构分析中可获得B19-VP2的氨基酸序列,利用ANTHEWIN和DNASIS软件对B19-VP2的表位进行分析;在此基础上设计出B19-VP2靶区域引物,为了克隆方便和插入方向正确,特意在两条引物上分别加入HindⅢ和BamHⅠ内切酶位点;利用PCR技术从含B19病毒DNA序列的质粒中扩增出VP2基因;将其连接在pGEM-T质粒上,转化JM109,运用pGEM... 

【文章来源】:郑州大学河南省 211工程院校

【文章页数】:45 页

【学位级别】:硕士

【文章目录】:
中文摘要
英文摘要
1 前言
    1.1 基因疫苗的研究现状
    1.2 人微小病毒B19的致病性及生物学性状
    1.3 研究的目的、内容和意义
2 实验材料
    2.1 材料
    2.2 主要仪器设备
    2.3 实验中配制的主要试剂
3 实验方法
    3.1 目的基因(B19-VP2)的克隆
    3.2 目的基因(B19-VP2)的亚克隆
    3.3 基因疫苗pcDNA3.1-VP2的大量制备和免疫活性测定
4 实验结果
    4.1 表位分析结果
    4.2 靶基因扩增结果
    4.3 靶基因酶切鉴定结果
    4.4 克隆和亚克隆重组子鉴定结果
    4.5 pGEM-T-VP2和pcDNA3.1-VP2的序列分析结果
    4.6 ELISA结果
5 讨论
    5.1 B19-VP2蛋白的表位
    5.2 真核表达载体的构建
    5.3 真核表达载体的表达
    5.4 构建pcDNA3.1-B19-VP2真核表达载体的意义
6 结论
    6.1 B19-VP2主要抗原表位的分析
    6.2 目的基因的克隆
    6.3 目的基因的亚克隆
    6.4 基因疫苗的免疫效应
参考文献
综述
致谢


【参考文献】:
期刊论文
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[9]人细小病毒B19基因变异研究进展[J]. 孙新.  国外医学(流行病学传染病学分册). 1999(02)
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本文编号:3570669

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