华支睾吸虫膜抗原/排泄分泌抗原酸性磷酸酶的克

发布时间：2022-01-09 03:58

　　目的:对华支睾吸虫（Clonorchis sinensis,Cs）成虫酸性磷酸酶（acid phosphatase,AP）进行克隆、表达、生物学特征分析、组织定位及膜抗原/排泄分泌抗原鉴定。方法:对Cs AP进行生物信息学、分子生物学、免疫组化及明胶酶谱分析。结果:从Cs c DNA文库中筛选出编码AP新基因,全长1 410 bp,重组并由大肠杆菌表达、纯化,得到分子量为55 k D的重组蛋白Cs AP。Western blotting分析表明,Cs AP既是膜抗原又是分泌排泄抗原;免疫组化显示,Cs AP荧光显示于成虫的表皮层和肠支,在囊蚴也有显示,在雷蚴和尾蚴未显示荧光;ELISA分析表明Cs AP识别华支睾吸虫病人和日本血吸虫病人存在吸虫间的交叉免疫反应,Cs AP及粗抗原识别轻、中、重度感染程度华支睾吸虫病人的差别不明显。重组蛋白免疫大鼠后,总Ig G抗体滴度于3周达较高峰,抗体效价大于1∶25 600。明胶降解实验表明:Cs AP具降解胶原能力。结论:上述结果表明,Cs AP在大肠杆菌中高效表达,具有较好的免疫原性,但血清诊断价值不理想;Cs AP可能既是膜抗原,又是排泄分泌... 

【文章来源】：中国病理生理杂志. 2014,30(11)北大核心CSCD

【文章页数】：7 页

【文章目录】：
材料和方法
    1 Cs AP生物信息学分析
    2 Cs AP克隆、表达和纯化
    3 C.sinensis排泄分泌抗原、粗抗原及膜蛋白的制备及GST标签蛋白的纯化
    4 抗血清制备
    5 Western blotting分析
    6 Cs AP于C.sinensis各发育阶段免疫组化定位
    7 健康及C.sinensis感染、日本血吸虫 (Schistoso-ma japonicum, S.japonicum, Sj) 感染人血清
    8 明胶酶谱法分析Cs AP降解胶原能力
    9 ELISA
    1 0 统计学处理
结果
    1 Cs AP生物信息学分析
    2 Cs AP在大肠杆菌BL21 E.coli表达与纯化
    3 Cs AP重组蛋白Western blotting分析
    4免疫荧光分析Cs AP重组蛋白在C.sinensis的组织定位和发育时期定位
    5 Cs AP对胶原的降解作用
    6 Cs AP重组蛋白ELISA分析
讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]益骨胶囊含药血清对大鼠破骨细胞凋亡和分泌抗酒石酸酸性磷酸酶的影响[J]. 舒晓春,张荣华,朱晓峰,彭柯萍.  中国病理生理杂志. 2003(09)
[2]免疫调节剂对大鼠巨噬细胞脂质过氧化物和酸性磷酸酶的影响[J]. 吕建新,金丽琴,陈国荣,陈希贤,陆永绥,蔡勤.  中国病理生理杂志. 1999(02)



本文编号：3577911