多房棘球绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶基因的克

发布时间：2022-01-19 04:56

　　目的克隆多房棘球绦虫（Echinococcus multilocularis,Em）硫氧还蛋白过氧化物酶（Thioredoxin peroxidase, TPx）基因,构建原核表达载体,诱导表达EmTPx蛋白,并初步评价其免疫诊断价值。方法从沙鼠中分离多房棘球绦虫原头蚴,提取总RNA,采用RT-PCR方法获取EmTPx的cDNA片段,克隆至原核表达载体pET-28a,构建重组表达质粒pET-28a-EmTPx,转化大肠埃希菌BL21进行目的蛋白的诱导表达及纯化,免疫小鼠制备抗EmTPx重组蛋白（rEmTPx）的多抗血清。通过Western blot对rEmTPx的免疫学特性进行鉴定,通过间接ELISA试验评价其免疫诊断价值。结果 PCR扩增EmTPx基因片段长度为582 bp,测序证实重组表达质粒pET-28a-EmTPx构建正确,表达的目的蛋白相对分子质量约为26×10³,与理论值相符。Western blot显示该蛋白可被鼠抗rEmTPx多抗血清识别,以rEmTPx为抗原采用间接ELISA法检测AE患者血清,特异抗体的敏感性为66.2%,特异性为87.5%。结... 

【文章来源】：中国病原生物学杂志. 2019,14(06)北大核心CSCD

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【部分图文】：

图１ＥｍＴＰｘ基因的ＰＣＲ扩增（Ａ）及重组质粒ｐＥＴ２８ａ－ＥｍＴＰｘＭＤＮＡ分子质量标准（ＤＬ２０００）

组蛋白的免疫活性鉴定用纯化的ＥｍＴＰｘ重组蛋白免疫小鼠，其抗血清效价持续升高，两次加强免疫后的抗体效价可达１∶２５６０００（ＥＬＩＳＡ法）。用获得高效价血清作为一抗进行Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ，结果见图５。ＥｍＴＰｘ重组蛋白和Ｅｍ原头蚴天然抗原能被抗ＥｍＴＰｘ蛋白多抗血清识别，说明ＥｍＴＰｘ重组蛋白具有免疫原性。Ｍ蛋白分子质量标准１抗ＥｍＴＰｘ蛋白多抗血清与ＥｍＴＰｘ重组蛋白反应条带２Ｅｍ原头蚴天然蛋白反应条带图５ＥｍＴＰｘ重组蛋白的免疫活性鉴定（Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ法）ＭＰｒｏｔｅｉｎｍａｒｋｅｒｓ１ＥｍＴＰｘｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｐｒｏｔｅｉｎ２ＥｍｐｒｏｔｏｓｃｏｌｅｃｅｓａｎｔｉｇｅｎＦｉｇ．５ＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌａｃｔｉｖｉｔｙｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＥｍＴＰｘｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｐｒｏｔｅｉｎ（Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ）５ＥｍＴＰｘ重组蛋白免疫诊断价值评价以纯化后的ＥｍＴＰｘ重组蛋白为诊断抗原，通过间接ＥＬＩＳＡ法检测ＡＥ患者血清中的ＥｍＴＰｘ抗体，结果显示，以ＲＯＣ曲线法确定ＣＵＴＯＦＦ值为０．３８３５，该抗原诊断的敏感性为６６．２２％（４９／７４），特异性为８７．５０％（２１／２４）。讨论棘球蚴侵入人体肝脏等器官寄生后生长缓慢，往往数年后才出现临床症状，使得ＡＥ的早期诊断较为困难，且患者一旦确诊均已处于中晚期。ＡＥ患者晚期病灶边缘呈浸润性生长，可侵犯胆道、下腔静脉、侵蚀邻近组织器官或发生远处转移，

【参考文献】：
期刊论文
[1]西藏自治区人体泡型包虫病分布及中间宿主感染调查[J]. 贡桑曲珍,伍卫平,严信留,薛垂召,边巴卓玛,艾佳佳,旦珍旺久,罗钊辉,李斌.  中国病原生物学杂志. 2017(12)
[2]泡型肝包虫病的治疗进展[J]. 龙爽,朱鹏,宋旭彤,邓绍平.  实用医院临床杂志. 2017(01)
[3]泡型包虫病患者肝脏组织TGF-β1和Gadd45γ基因的表达及其在肝损伤中的作用研究[J]. 张传山,杨舒婷,毕晓娟,李亮,吕国栋,林仁勇.  中国病原生物学杂志. 2016(10)
[4]棘球蚴病防治成就及面临的挑战[J]. 温浩,吐尔干艾力·阿吉,邵英梅,林仁勇,李海涛,吐尔洪江·吐逊,吕国栋,张文宝.  中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2015(06)
[5]肝泡型包虫病诊治新进展[J]. 麦冉穆尼沙·吐尔逊,邵英梅.  腹部外科. 2015 (02)
[6]肝泡型包虫病的诊断与治疗现状[J]. 孙寅,邵英梅.  医学综述. 2014(09)
[7]Peroxiredoxin与寄生虫[J]. 舒勍.  中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2002(02)
[8]多房棘球绦虫原头节蛋白抗原的免疫诊断价值[J]. 李淑萍,陈雅棠,蒋次鹏,邱加闽,余登高.  中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2001(01)
[9]广州管圆线虫功能蛋白研究进展[J]. 姚丽丽,黄慧聪,潘长旺.  国际医学寄生虫病杂志. 2013 (01)



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