EV71可溶性2C蛋白的原核表达及纯化

发布时间：2022-02-04 22:04

　　目的:本课题采用生物信息学方法、选用不同表达载体克隆表达EV71 2C蛋白,最终获得高纯度、性状均一、可正确折叠的可溶性蛋白,为蛋白质的晶体筛选奠定基础。方法:1.EV71生物信息学分析从NCBI数据库下载EV71（200804株）的2C的基因序列和氨基酸序列,采用Protparam软件、Protean软件、Top Pred 2服务器、Pfam软件、SMART软件分别对EV71 2C蛋白的基本理化性质、二级结构、疏水性、核心结构域等信息进行初步预测,根据氨基酸的疏水性分析结果和功能结构域分布,设计6个不同长度的氨基酸片段。2.重组EV71 2C截短片段基因克隆以EV71全长基因组A12质粒为模板,设计引物:2C-91aa-Bam HI-5、2C-118aa-Bam HI-5、2C-256aa-Xho I-3T、2C-296aa-Xho I-3T、2C-316aa-Xho I-3T。对上述截取的6个2C片段进行PCR扩增,将扩增后获得的DNA片段分别连接至带有His标签的p Gl01载体和带有MBP促溶标签的psj8载体上,构建12个重组质粒:6个包含p Gl01载体-2C截短片段的重组... 

【文章来源】：济南大学山东省

【文章页数】：74 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 前言
    1.1 EV71概述
    1.2 蛋白质结构生物学在研究病毒致病机制中的意义
    1.3 EV71蛋白质组学研究进展
        1.3.1 EV71衣壳蛋白
        1.3.2 EV71功能蛋白
    1.4 2C蛋白的研究现状
        1.4.1 膜结合功能
        1.4.2 RNA结合活性
        1.4.3 NTPase活性
        1.4.4 与病毒衣壳蛋白VP3互作
        1.4.5 解旋酶活性
        1.4.6 其他功能
    1.5 获得可溶蛋白是蛋白质结构生物学研究的关键
    1.6 本课题研究的研究内容和意义
第二章 实验材料及仪器
    2.1 实验材料
        2.1.1 生物信息学软件
        2.1.2 验菌株、载体
        2.1.3 试剂及工具酶
        2.1.4 常用试剂配制
    2.2 实验仪器
第三章 EV712C蛋白生物信息学分析及截短片段设计
    3.1 实验方法
        3.1.1 生物信息学分析
        3.1.2 片断设计的基本原则
    3.2 生物信息学分析结果及片段截取
        3.2.1 生物信息学分析结果
        3.2.2 片段截取
    3.3 讨论
第四章 EV712C截短片段的基因克隆
    4.1 实验方法
        4.1.1 重组EV71 pGl01/PSJ8载体-2C截短片段克隆表达
    4.2 实验结果
        4.2.1 重组EV71 pGl01载体-2C截短片段、psj8载体-2C截短PCR扩增结果
        4.2.2 重组质粒酶切鉴定结果
    4.3 讨论
第五章 EV712C截短蛋白的表达、纯化和晶体普筛
    5.1 实验方法
        5.1.1 pGl01载体-2C截短蛋白及psj8载体-2C截短蛋白的表达
        5.1.2 pGl01载体-2C截短蛋白及psj8载体-2C截短蛋白纯化
        5.1.3 蛋白质晶体培养
    5.2 实验结果
        5.2.1 蛋白质表达及可溶性分析
        5.2.2 psj8载体-2C截短蛋白M1及M4的分子筛层析纯化
    5.3 讨论
第六章 结论
参考文献
综述
    参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢


【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3614022