小鼠巨噬细胞集落刺激因子的克隆及在真核细胞表达

发布时间：2022-02-10 09:00

　　目的 克隆小鼠M-CSF基因开放阅读框全长序列552个氨基酸，并在真核细胞中表达。方法 （1）提取L929细胞总RNA，RT-PCR扩增M-CSF基因，产物与pGEM-T Easy质粒连接，转化后酶切鉴定，DNA序列分析。（2）将M-CSF基因重组体亚克隆入真核表达载体pEGFP-N3，转化后酶切鉴定。（3）将重组体pEGFP-N3-M-CSF质粒DNA转染CHO细胞，倒置荧光显微镜下观察细胞绿色荧光产生情况。收获转染后细胞,提取总RNA，进行RT-PCR，荧光定量PCR检测，用Excel软件对荧光定量PCR结果进行相关性分析。 结果 （1）电泳结果显示RT-PCR产物的长度为1690bp，与预期结果相符。产物纯化、连接、转化后酶切结果提示获取了小鼠M-CSF基因重组质粒pGEM-T Easy-M-CSFa。为了测通插入片段的全序列，采用亚克隆的方法，得到五个阳性重组体EH、EB、SB、SH、SG，测序发现在重组体pGEM-T Easy-M-CSFb第9位缺失了一个G碱基，引起阅读框的错误，在第1093位发生了碱基颠换，由A变成G，其编码的氨基酸由苏氨酸变成丙氨酸。为了修复突变位点，从... 

【文章来源】：山西医科大学山西省

【文章页数】：53 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
论 文
    前 言
    材料与方法
    结 果
    讨 论
    结 论
    参考文献
    附 录
综 述
    正 文
    参考文献
个人简介
致 谢



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