miR-186海绵载体的构建及其在EA.hy926细胞株中的表达

发布时间：2022-02-14 21:19

　　目的:构建微小RNA-186（miR-186）基因的海绵载体,建立稳定敲减miR-186的EA.hy926细胞株。方法:化学合成miR-186海绵体序列,并克隆到慢病毒FV040表达载体上;采用lipofectamine 2000共转染FV040-miR-186-sponge载体和慢病毒辅助包装质粒到HEK293T细胞,包装慢病毒,测定病毒滴度;FV040-control慢病毒作为对照组,FV040-miR-186-sponge作为实验组,分别感染EA.hy926细胞,筛选稳转细胞株;采用荧光定量PCR（qPCR）法检测空白对照组、FV040-control对照组及FV040-miR-186-sponge实验组中EA.hy926细胞miR-186的相对表达水平。结果:测序结果显示克隆的目的基因序列与设计的miR-186海绵体序列完全一致。在感染的EA.hy926细胞中观察到绿色荧光蛋白（GFP）的表达。FV040-control包装的慢病毒滴度为2×10⁸TU·mL^-1,FV040-miR-186-sponge组慢病毒滴度为6×10^... 

【文章来源】：吉林大学学报(医学版). 2019,45(03)北大核心CSCD

【文章页数】：6 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 细胞株和主要试剂
    1.2 PCR引物的设计和合成
    1.3 miR-186-sponge慢病毒载体的构建
    1.4 慢病毒包装和病毒滴定
        1.4.1 慢病毒包装
        1.4.2 病毒滴度测定
    1.5 miR-186-sponge稳定转染细胞系的建立和鉴定
        1.5.1 慢病毒感染EA.hy926细胞系
        1.5.2 荧光定量PCR (qPCR) 法检测EA.hy926细胞中miR-186的相对表达水平
    1.6 统计学分析
2 结果
    2.1 miR-186海绵载体的构建和验证
    2.2 病毒包装、EA.hy926细胞感染和稳转细胞株的建立
    2.3 EA.hy926细胞中miR-186相对表达水平
3 讨论



本文编号：3625289