小鼠脂肪组织成纤维细胞系的建立以及C/EBPα，PPARγ和Pref-1原核表达，多克隆抗体制备

发布时间：2022-02-18 13:48

　　目的: 通过建立内脏脂肪组织成纤维细胞系（visceral adipose fibroblast cell line,VAFC）以及对其基因表达特征和功能的研究,探讨脂肪组织成纤维细胞在肥胖相关慢性炎症中的作用:通过表达Pref-1-GST融合蛋白及制备C/EBPα,PPAR γ多克隆抗体,为探讨Pref-1抑制脂肪细胞分化的作用机制作准备。 方法: 1 通过组织块培养法分离建立VAFC细胞系: 2 原子力显微镜（atomic force microscope,AFM）和透射电子显微镜（transmittion electronic microscope,TEM）分析VAFC细胞形态特征,染色体分析分析遗传特征,RT-PCR和免疫细胞化学染色分析基因表达特征; 3 VAFC条件培养基（conditioned medium,CM）处理骨髓细胞（bone marrow cells, BMCs）,6天后通过酵母吞噬实验,分析VAFC CM对巨噬细胞发育的影响; 4 在无血清条件下,VAFC CM处理BMCs,24 h后用PE-膜联蛋白-V（Annexin-... 

【文章来源】：华中农业大学湖北省211工程院校教育部直属院校

【文章页数】：55 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
ABSTRACT
    Results
第一部分 小鼠内脏脂肪组织成纤维细胞系的建立
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 主要材料
        2.2 主要仪器
        2.3 VAFC细胞系建立
        2.4 原子力显微镜(AFM)观察
        2.5 透射电子显微镜(TEM)观察
        2.6 生长特性和染色体分析
        2.7 逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)
        2.8 免疫荧光细胞化学染色分析
        2.9 VAFC条件培养基(VAFC CM)
        2.10 吞噬试验
        2.11 VAFC CM对 BMCs凋亡的影响
        2.12 VAFC CM对淋巴细胞增殖的影响
        2.13 统计学处理
    3 结果与分析
        3.1 建立VAFC细胞系
        3.2 形态学分析
        3.3 生长特征和染色体分析
        3.4 基因表达分析
        3.5 VAFC CM对巨噬细胞发育的影响
        3.6 VAFC CM对 BMCs凋亡的影响
        3.7 VAFC CM对淋巴细胞增殖的影响
    4 讨论
第二部分 小鼠 C/EBPAА，PPARG和PREF-1原核表达以及多克隆抗体制备
    1 前言
        1.1 肥胖
        1.2 脂肪细胞分化与发育
        1.3 脂肪细胞分化的调控因素
        1.4 C/EBP家族
        1.5 PPAR家族
        1.6 Preadipocyte factor-1(pref-1)
    2 材料与方法
        2.1 主要材料和试剂
        2.2 总 RNA抽提
        2.3 逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)
        2.4 构建原核表达质粒
        2.5 融合蛋白表达，纯化及鉴定
        2.6 抗血清制备及鉴定
    3 结果与分析
        3.1 RT-PCR扩增C/EBPα，PPARγ和 Pref-1 cDNA片段
        3.2 菌落 PCR鉴定重组质粒
        3.3 重组质粒 DNA序列测定
        3.4 融合蛋白表达，纯化及鉴定
        3.5 抗血清鉴定
    4 讨论
参考文献
总结
论文发表
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]脂肪细胞的分化调控[J]. 周丽斌.  国外医学.内分泌学分册. 2001(04)



本文编号：3630946