HMCD59糖基化前后的抗补体活性研究

发布时间：2022-05-02 22:12

　　目的：构建表达人突变CD59（HMCD59）蛋白的重组真核表达载体，建立HMCD59真核表达系统，获得表达HMCD59蛋白的中国仓鼠卵巢细胞（CHO）细胞株，深入研究HMCD59在糖尿病血管增殖症中的作用。为阐明糖尿病血管并发症的发病机理奠定基础。 方法：分别构建两种含有HMCD59全长CDNA序列的重组pALTER质粒，并与pCDNA3质粒，按3：1比例混合后，运用脂质体介导法共转染CHO细胞（编号为HM5-CHO及HM6-CHO），用新霉素类似物G418初步筛选出阳性克隆。应用荧光抗体技术、流式细胞术、免疫酶标技术、western-blot技术进一步检测HMCD59蛋白在真核细胞膜表面的表达；收集CHO细胞作为抗原，免疫家兔以获得多克隆抗体，并通过BCECF染料释放试验检测HMCD59蛋白糖化前后的抗补体活性。 结果：1、成功构建了表达HMCD59真核细胞（CHO）表达系统。运用脂质体介导法将重组突变CD59-pALTER及pcDNA3共转染CHO细胞，用含有400ug／mlG418的1640培养基培养2周，筛选出阳性克隆。筛选出的阳性克隆细胞以荧光抗体技术、免疫酶标技... 

【文章页数】：68 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
英文摘要
前言
材料与方法
技术路线
结果
讨论
结论与小结
附录
参考文献
致谢
综述及参考文献


【参考文献】：
期刊论文
[1]糖基化终产物对大鼠主动脉平滑肌细胞sis基因表达的作用[J]. 刘乃丰,黄晓明,金晖,胡向阳,张丽容.  中国糖尿病杂志. 1997(04)



本文编号：3650055