人源性抗乙型肝炎表面抗原（抗HBs）噬菌体单链抗体库的构建

发布时间：2022-05-05 19:34

　　目的 构建人源性噬菌体单链抗体库，以筛选人源性抗乙型肝炎病毒表面抗原（抗HBs）的基因工程抗体。 方法 （1）抽取注射过乙肝疫苗并产生抗HBs抗体的正常人外周血，分离淋巴细胞，提取细胞总RNA （2）以Oligo（dT）₁₅为引物将mRNA反转录为cDNA （3）根据抗体分子的第一框架区和第四框架区的保守性，设计简并引物 （4）PCR扩增重链和轻链的可变区序列（V_H和V_L） （5）设计一对互为模板的引物，PCR扩增连接肽Linker基因 （6）由Linker片段通过重叠延伸PCR连接扩增的V_H和V_L基因，形成单链抗体（ScFv）基因 （7）将ScFv基因克隆入具有相同酶切位点的噬菌粒载体pCANTAB5E中，然后转化大肠杆菌E.Coli TG1，辅助噬菌体M13K07的拯救，收集噬菌体上清，即为噬菌体抗体库 结果 （1） 我们设计的扩增抗体重链和轻链可变区的简并引物，成功地扩增出了V_H和V... 

【文章页数】：53 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
英文摘要
前言
一、 淋巴细胞的分离纯化
二、 细胞总RNA的提取
三、 cDNA的合成
四、 PCR扩增抗体可变区基因
五、 Linker连接片段的制备
六、 人单链Fv(ScFv)片段的组装
七、 ScFv单链噬菌体抗体库的构建
八、 总结
正文参考文献
综述
    综述参考文献
致谢



本文编号：3650877