CRISPR/Cas9系统介导Slc6a6基因敲除大鼠的繁殖与鉴定

发布时间：2022-07-13 17:05

　　目的利用CRISPR/Cas9技术构建牛磺酸转运体基因（solute carrier family 6 member 6,Slc6a6）敲除大鼠,繁殖并鉴定,为研究牛磺酸缺失对神经系统疾病的影响提供稳定的大鼠模型。方法针对Slc6a6基因第5外显子,设计向导RNA（single-guide RNA,sgRNA）介导Cas9核酸酶与靶点DNA特异性结合,并切割基因组DNA,被切割后的DNA进行重组修复,从而实现基因的敲除。通过基因型鉴定和测序分析检测新生大鼠基因型。利用Real-time PCR、Western blot技术和免疫组化等方法,分析大鼠脑组织的牛磺酸转运体（taurine transporter,TauT）的mRNA表达和蛋白表达,建立Slc6a6基因敲除大鼠模型。结果 F3代出现21只Slc6a6基因敲除纯合子(TauT^-/-),54只杂合子(TauT^+/-),27只阴性(TauT^+/+),F3代纯合率约为20.59%,基本符合孟德尔遗传定律。Slc6a6基因敲除纯合子大鼠脑组织mRNA水平基本不表达,Ta... 

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【文章目录】：
1 材料和方法
    1.1 实验动物
    1.2 主要试剂与仪器
    1.3 实验方法
        1.3.1 TauT-/-大鼠的构建和繁殖
        1.3.2 基因组提取、扩增和测序
        1.3.3 Real-time PCR检测TauT-/-和TauT+/+大鼠脑组织中Slc6a6的表达
        1.3.4 Western blot技术检测TauT-/-和TauT+/+大脑组织中TauT蛋白表达
        1.3.5 免疫组化检测TauT-/-和TauT+/+大脑组织TauT蛋白的表达
    1.4 统计学方法
2 结果
    2.1 大鼠的构建和繁殖情况
    2.2 基因型鉴定和测序结果
    2.3 Real-time PCR检测TauT-/-和TauT+/+大鼠脑组织Slc6a6的表达
    2.4 Western blot技术检测TauT-/-和TauT+/+大鼠脑组织TauT蛋白的表达
    2.5 TauT-/-和TauT+/+大鼠脑组织免疫组化结果
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]利用CRISPR/Cas9敲除大鼠胰岛素受体底物1（Irs1）基因[J]. 马元武,马婧,路迎冬,陈炜,张旭,于磊,张连峰.  中国比较医学杂志. 2014(03)
[2]基因工程大鼠研究进展[J]. 王贵利,张连峰.  中国比较医学杂志. 2013(03)
[3]牛磺酸研究进展[J]. 白小琼,孔德义.  中国食物与营养. 2011(05)
[4]牛磺酸对急性重型颅脑创伤大鼠脑水肿的作用[J]. 张学斌,黄慧玲,常小丽,蔡英,姚鑫.  中华创伤杂志. 2010 (10)



本文编号：3660429