益肾健脾方干预少弱精子症小鼠模型的实验研究

发布时间：2017-05-14 20:14

  本文关键词：益肾健脾方干预少弱精子症小鼠模型的实验研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：男性不育症是影响人类繁衍和健康的重大疾病,其中少弱精子症是十分常见的原因。其具体的发病机制尚未完全阐明,现代医学在少弱精子症诊断方面已日渐成熟,但治疗层面仍缺乏比较有效手段。目前临床上尚缺乏理想的治疗药物,且用药多为经验性。外科治疗能够在一定程度上矫正器质性病变及梗阻因素引起的男性不育症。近些年辅助生殖技术发展迅速,但由于存在费用昂贵、成功率不高、遗传和伦理等诸多方面的问题。中医药辨证论治具有诸多优势。当前治疗仍多从肾立论、兼以祛邪,而忽视健脾益气的重要性。我们前期研究发现益肾健脾法治疗能够显著改善精液质量。根据长期临床实践并结合中医学理论“肾为先天之本,脾为后天之源”,提出“脾肾亏虚,精失所养”为少弱精子症发生的基本病因病机,治宜“益肾健脾填精”为主。目前对于少弱精子发病机制的研究当中,自由基损伤学说及细胞凋亡学说是当前研究热点。其中线粒体信号通路是一条重要的凋亡通路,但是目前对于此通路系统与少弱精子症关系的研究仍不够深入。现代医学研究表明线粒体为所有物质彻底氧化分解的最终场所,其核心功能是进行氧化磷酸化及三羧酸循环合成三磷酸腺苷(ATP),直接为细胞的生命活动供应能量。本研究的重点为验证益肾健脾方治疗少弱精子症是否亦是通过“改善线粒体结构和功能”这一可能的环节和作用机制。为中医学理论“脾肾亏虚,精失所养”在防治少弱精子症临床应用方面奠定新的实验基础。目的：观察益肾健脾方对少弱精子症小鼠模型睾丸、附睾组织病理、精液质量、血清性激素水平、线粒体超微结构及线粒体膜电位(MMP)的影响。方法：取雄性巴比赛(BALB/c)小鼠共60只,将其随机分为正常组、模型组、阳性对照组(东维力口服液)、中药组(益肾健脾方低、高剂量组)各12只；除正常组以外各组小鼠均给予连续每天灌胃雷公藤多苷(GTW)4周(40mg/kg),制备少弱精子症小鼠模型；造模结束后,阳性对照组、中药组分别给予连续每天灌胃东维力口服液(10ml/kg)、益肾健脾方低、高剂量(分别为1.32.70mg/kg),正常组、模型组均给予连续每天灌胃等量蒸馏水(10ml/kg),共4周。治疗结束后,小鼠附睾、睾丸组织病理切片、HE染色,观察其组织病理学变化；应用伟力精子测试仪检测小鼠精液质量；应用流式细胞技术、荧光染色法检测小鼠精子MMP中正常精子百分率(JC-1+%)；应用透射电子显微镜观察小鼠精子线粒体超微结构；应用酶联免疫夹心法检测小鼠血清性激素水平。结果：1睾丸、附睾病理：正常组小鼠睾丸曲细精管排列规则、紧密,其内包含各级生精细胞和支持细胞(Sertoli细胞)。模型组小鼠睾丸曲细精管萎缩,各级生精细胞排列紊乱、疏松,数量明显减少,较为严重者仅有Sertoli细胞。药物干预后少数曲细精管内生精细胞减少,病变程度及范围较模型组显著减轻。正常组附睾管腔外间质组织充实有序,腔内上皮细胞清晰,排列整齐呈高柱状,可见大量精子。模型组附睾管间隙增加、间质组织减少,腔内上皮细胞排列紊乱或缺失、呈矮柱状,未见或少见精子。药物干预后各组附睾腔外组织较模型组充实有序,腔内上皮细胞数量增加、排列尚整齐、结构近乎完整,可见较多精子。2精液质量：阳性对照组、中药低、高剂量组A级、(A+B)级、精子总活力高于模型组(P0.05),差异显著,具有统计学意义；中药低剂量组高于阳性对照组及中药高剂量组,差异显著,具有统计学意义(P0.05);中药高剂量组与阳性对照组相比无显著性差异(P值分别为0.4030、0.4676、0.4405,P0.05),无统计学意义。正常组、阳性对照组、中药低、高剂量组的精子浓度、总数高于模型组,差异显著,具有统计学意义(P0.05)；阳性对照组、中药低、高剂量组相互之间无显著性差异(P0.05),无统计学意义。3精子线粒体结构及膜电位：模型组小鼠精子MMP水平低于正常组(P0.001),差异显著具有统计学意义；中药低剂、高剂量组高于阳性对照组,差异显著具有统计学意义(P值分别为0.0008、0.0001,P0.05)；中药低剂量组高于阳性对照组,差异显著具有统计学意义(P=0.02530.05)。正常组小鼠精子的尾部中段横切面可见完整的线粒体鞘结构,呈环形包绕着致密纤维和轴丝,外周9根纤维,中间9根轴丝和内部2个结构清晰的微管,共同构成了9+9+2结构。模型组整个精子线粒体肿胀明显、纤维明显疏松、轴丝断裂,9+9+2结构遭受破坏。药物干预后各组精子线粒体鞘结构较完整,肿胀较前显著减轻,纤维、轴丝结构较整齐、完整,9+9+2结构尚清晰。4血清性激素水平：模型组小鼠血清FSH、LH水平高于正常组(P值分别为0.0001、0.0433,P0.05),差异显著具有统计学意义；药物干预后小鼠血清FSH、LH水平与正常组相比无显著差异(P0.05)；与模型组相比,阳性对照组,中药低、高剂量组小鼠血清FSH、LH水平低于模型组(P0.05),差异显著有统计学意义；模型组小鼠血清T低于正常组(P=0.00090.05),差异显著有统计学意义；药物干预后各组小鼠血清T水平与模型组相比无显著差异(P0.05)。结论：益肾健脾方能够调节少弱精子症小鼠血清性激素水平；减轻GTW对小鼠睾丸和附睾的病理损害；改善精子线粒体的结构,提高精子MMP水平；改善精子发生及成熟,从而显著改善少弱精子症小鼠的精液质量。
【关键词】：雷公藤多苷 精液质量 线粒体 血清性激素水平 少弱精子症 益肾健脾方
【学位授予单位】：北京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R277.5;R-332
【目录】：

• 摘要5-8
• ABSTRACT8-12
• 英文缩略词12-13
• 第一部分 文献综述13-41
• 1 中医文献研究13-28
• 1.1 少弱精子症中医学认识源流13-14
• 1.2 少弱精子症中医学病因病机14-16
• 1.3 少弱精子症中医药治疗16-23
• 1.4 中西医结合治疗少弱精子症23-24
• 1.5 中医药治疗少弱精子症的实验研究24-25
• 参考文献25-28
• 2 西医文献研究28-41
• 2.1 西医诊断标准及流行病学28-29
• 2.2 少弱精子症的病因病机29-31
• 2.3 少弱精子症的分子生物学机制31-33
• 2.4 西医对少弱精子症的治疗33-35
• 2.5 辅助生殖技术35-36
• 参考文献36-41
• 前言41-43
• 第二部分 实验研究43-61
• 1 材料43-45
• 2 方法45-49
• 2.1 实验造模45
• 2.2 实验分组及干预45-46
• 2.3 实验取材46
• 2.4 实验检测46-49
• 2.5 统计学方法49
• 3 结果49-56
• 4 小结56
• 5 讨论56-61
• 结语61-62
• 1 结论61
• 2 创新点61
• 3 不足及展望61-62
• 参考文献62-64
• 附录64-70
• 致谢70-71
• 在学期间主要研究成果71-72
• 个人简历72

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本文编号：366145