用于质谱分析的细胞总蛋白三种酶切方法比较

发布时间：2022-08-06 20:35

　　目的比较无去污剂的细胞总蛋白三种酶切样品制备方法。方法采用细胞吸入胶内酶切法、蛋白吸入胶内酶切法及超滤管辅助溶液酶切法对细胞总蛋白进行酶切,再用液质联用技术对三种酶切方法制备的多肽样品进行蛋白鉴定。结果通过液质联用技术鉴定,细胞吸入胶内酶切法制备的样品获得3 835个蛋白,蛋白吸入胶内酶切法制备的样品获得2 340个蛋白,超滤管辅助溶液酶切法制备的样品获得4 248个蛋白。韦恩图分析显示,不同酶切方法得到的蛋白种类存在差异。对细胞吸入胶内酶切法和超滤管辅助溶液酶切法所获得的蛋白进行基因本体（gene ontology,GO）分析发现,细胞吸入胶内酶切法能获得更多膜结合蛋白。结论三种无去污剂酶切方法,避免了去污剂的种种弊端,其中超滤管辅助溶液酶切法和细胞吸入胶内酶切法更优。 

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 实验样品
    1.2 主要试剂和仪器
    1.3 干胶粒制备
    1.4 293T细胞蛋白提取
    1.5 细胞吸入胶内酶切法
    1.6 蛋白吸入胶内酶切方法
    1.7 超滤管辅助溶液酶切法
    1.8 质谱检测
    1.9 数据处理
2 结果
    2.1 细胞总蛋白酶切后多肽样品液质联用检测结果
    2.2 三种酶切法所得样品鉴定蛋白韦恩图分析
    2.3 两种较优酶切方法所得样品鉴定的蛋白Gene Ontology分析
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]小鼠细胞差异表达蛋白SWATH定量方法的建立[J]. 胡家,李慎涛,王劲松,李蕾,殷爱红.  首都医科大学学报. 2017(06)
[2]人乳牙牙髓干细胞全蛋白质非胶分级分离电泳分析[J]. 胡家,李蕾,王劲松,赵君朋.  山西医科大学学报. 2016(03)
[3]Hela细胞蛋白质分离和肽质量指纹谱鉴定方法的建立[J]. 胡家,李燕英,孙丽翠,殷爱红,武文琦,贺俊崎.  首都医科大学学报. 2009(03)



本文编号：3670323