外周血白细胞BCR/ABL基因产物分析及其临床应用

发布时间：2022-10-05 23:16

　　慢性髓性白血病（Chronic Myelogenous Leukemia,CML）是一种常见的骨髓干细胞恶性增生性疾病,发病率居各种白血病第三位,仅次于急性粒细胞性白血病（AGL）和急性淋巴细胞性白血病（ALL）,约60-70%患者死于慢性急变,绝大多数慢性髓性白血病患者的白细胞中都有细胞学标志物Ph染色体,该染色体为9号染色体与22号染色体发生部分遗传物质易位形成的,同时也形成两种融合基因即ABL/BCR和BCR/ABL,后一种基因可以表达出分子量为210 KDa的微量融合蛋白(P₂₁₀^bcr/abl)。在95%以上的慢性髓性白血病融合蛋白是呈阳性的,检测P₂₁₀^bcr/abl蛋白可以准确和特异地诊断慢性髓性白血病。基于这种理论我们建立了这一研究课题。 本研究的目的是建立一种新的适合于我们实验室条件的新技术,检测外周血白细胞内的P₂₁₀^bcr/abl蛋白,为临床提供特异、灵敏、快速诊断慢性髓性白血病的新方法。方法是从外周血中收集白细... 

【文章页数】：48 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
    1.1 髓性白血病(CML)临床表现
    1.2 慢性髓性白血病(CML)最大遗传标志
    1.3 费城染色体及其表达产物 P210~(bcr/abl)在CML发病中的分子机制
        1.3.1 c-abl 蛋白的正常结构及生化特性、生物学功能
        1.3.2 bcr 蛋白正常结构及生化特性的生物学功能
        1.3.3 bcr/abl 蛋白在 CML 发病中的作用
    1.4 目前有关慢性髓性白血病临床诊断方法简介
    1.5 本研究所涉及的分离技术方法简介
        1.5.1 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术（SDS-PAGE）
            1.5.1.1 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离原理
            1.5.1.2 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定原理
        1.5.2 蛋白印迹转移电泳
            1.5.2.1 蛋白印迹转移电泳应用
            1.5.2.2 蛋白印迹转移电泳分离原理
            1.5.2.3 蛋白印迹转移电泳固相支持
            1.5.2.4 印迹转移电泳的仪器装置
            1.5.2.5 印迹转移后固相纸膜的测
    1.6 有关慢性髓性白血病的热点问题
    1.7 本文研究的目的和意义
第二章 检测外周血白细胞 BCR/ABL 基因表达产物的实验报告
    2.1 实验材料
        2.1.1 材料来源
        2.1.2 实验仪器
        2.1.3 实验药品
        2.1.4 试剂配制
    2.2 实验方法
        2.2.1 白细胞的收集方法
            2.2.1.1 抗凝血的采集
            2.2.1.2 收集白细胞
            2.2.1.3 K562 细胞培养
        2.2.2 BCR/ABL 基因产物的分离—SDS—不连续系统板状凝胶电泳
            2.2.2.1 SDS 聚丙酰胺凝胶电泳分离操作步骤
                2.2.2.1.1 装板
                2.2.2.1.2 配胶
                2.2.2.1.3 凝胶液的灌注和聚合
                2.2.2.1.4 蛋白质样品的处理
                2.2.2.1.5 加样
                2.2.2.1.6 电泳
                2.2.2.1.7 剥胶和固定
                2.2.2.1.8 染色、脱色
        2.2.3 蛋白印迹电泳操作过程
            2.2.3.1 准备工作
            2.2.3.2 安装转移装置
            2.2.3.3 转移电泳
            2.2.3.4 对固定于纤维素滤膜上的蛋白质进行染色
            2.2.3.5 封闭硝酸纤维素滤膜的免疫球蛋白结合位点
            2.2.3.6 硝酸纤维素滤膜进行免疫结合
            2.2.3.7 印迹检测过程
第三章 结果与讨论
    3.1 实验结果
        3.1.1 SDS-PAGE 分离结果
        3.1.2 蛋白印迹转移结果
        3.1.3 对 ECL Western blotting 方法的灵敏度进行检测
        3.1.4 临床检测结果
    3.2 讨论
        3.2.1 临床应用结果的讨论
        3.2.2 方法建立涉及的几个问题
        3.2.3 本方法与目前几种诊断 CML 的方法的比较
        3.2.4 目前检测 CML 常用的三种方法比较
        3.2.5 创新点
        3.2.6 聚丙烯酰胺凝胶电泳操作中出现的问题及解决方法
        3.2.7 采用印迹转移电泳法应注意的几个问题
第四章 结论
附录 英文单词缩写表
参考文献
致谢



本文编号：3686687