人工修饰猪血红蛋白及其应用的初步研究

发布时间：2022-10-21 21:38

　　脱离红细胞后的血红蛋白四聚体结构不稳定、氧亲和力强、半衰期短，还会引起一定的肾毒性。化学修饰作为一种新兴技术，能有效地改善上述不良特性。无基质猪血红蛋白（SFH）由新鲜猪血溶血制得并经超速离心。0.45μm到0.22μm微孔滤膜过滤等步骤纯化，纯化产物与双（3，5-二溴水杨基）延胡索酸酯（简称DBBF）以1：2的摩尔比在脱氧、pH7.2、37℃环境中反应2小时，所得产物（DBBF-pHb）的氧亲和方大大下降，与天然蛋白质相比，DBBF-pHb具有明显的抗α₂β₂四聚体解聚的特性。经NHS活化酶活性mPEG以30：1的摩尔比与DBBF-pHb在脱氧室温条件下进一步反应，对所得产物的半饱和氧分压(P₅₀)、希尔系数（Hill）等有关血红蛋白携氧能力参数以及修饰程度和分子量的测定表明，这样的偶联修饰获得了携氧能力好、分子量适宜、四聚体稳定的产物mPEG-DBBF-pHb。 研究了SFH、DBBF-pHb以及mPEG-DBBF-pHb对动物免疫系统的影响。SFH引起的抗体滴度为1：400，DBBF修饰... 

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第一部分 文献综述（血红蛋白类血液替代品的研制及应用）
    1. 前言
    2. 血红蛋白类血液代用品
        2.1 无基质血红蛋白
        2.2 化学修饰血红蛋白
        2.3 微囊化血红蛋白
    3. 化学修饰Hb的携氧能力的评价
        3.1 氧亲和力
        3.2 Hill系数
        3.3 氧传递及其消耗速率
        3.4 血浆中二氧化碳分压
        3.5 半衰期
        3.6 血浆中metHb的含量
    4. 血红蛋白类血液替代品的实用性和安全性研究
        4.1 器官灌注和器官保存的研究
        4.2 血板聚集效应
        4.3 对补体系统和免疫系统的影响
        4.4 肾中毒和酸中毒现象
        4.5 缺血再灌注中血液动力学参数的变化
第二部分 论文部分
    第一章 聚乙二醇的活化
        1.1 引言
        1.2 材料和方法
            1.2.1 材料
            1.2.2 方法
                1.2.2.1 mPEG的活化
                1.2.2.2 mPEG活化程度的测定
                1.2.2.3 mPEG修饰蛋白质能力的测定
        1.3 结果与讨论
            1.3.1 mPEG活化程度的测定
            1.3.2 mPEG修饰蛋白质程度的测定
    第二章 无基质猪血红蛋白的制备、化学修饰及其性质
        2.1 引言
        2.2 材料和方法
            2.2.1 材料
            2.2.2 方法
                2.2.2.1 无基质猪血红蛋白的制备
                2.2.2.2 DBBF交联脱氧血红蛋白
                2.2.2.3 活性mPEG-SS修饰DBBF交联的猪血红蛋白
                2.2.2.4 氧解离曲线、半饱和氧分压（P_（50））、Hill系数的测定
                2.2.2.5 猪血红蛋白浓度的测定
                2.2.2.6 高铁血红蛋白含量的测定
                2.2.2.7 pH梯度等电聚焦电泳
                2.2.2.8 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳（不连续垂直电泳）
        2.3 结果与讨论
            2.3.1 猪血红蛋白及其化学修饰产物的理化性质和氧结合特性
            2.3.2 猪血红蛋白及其化学修饰产物的电泳
        2.4 小结
    第三章 偶联复合物的免疫原性的研究
        3.1 材料
            3.1.1 主要试剂
            3.1.2 主要仪器
        3.2 方法
            3.2.1 抗血清的制备
            3.2.2 酶联免疫吸附测定（ELISA）
        3.3 结果与讨论
    第四章 偶联复合物保存离体心脏的研究
        4.1 引言
        4.2 材料和方法
            4.2.1 材料
            4.2.2 方法
                4.2.2.1 保存液的配制
                4.2.2.2 离体心脏模型的构建及心肌细胞的保存
                4.2.2.3 电镜标本的制作与超微结构观察
        4.3 结果与讨论
    第五章 偶联复合物在缺血再灌注方面的初步研究
        5.1 引言
        5.2 材料和方法
            5.2.1 材料
            5.2.2 家兔缺血再灌注实验
            5.2.3 大鼠失血性休克实验
        5.3 结果与讨论
            5.3.1 家兔血液生化分析
            5.3.2 大鼠血常规分析
            5.3.3 大鼠血液血气分析
            5.3.4 动力学参数的变化
小结
参考文献
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]聚合牛血红蛋白抗原性的初步研究[J]. 陈琳,王鹤尧,卜凤荣.  免疫学杂志. 2000(01)
[2]双阿斯匹林交联分子血红蛋白在出血性休克中的应用[J]. 宋立强.  国外医学(创伤与外科基本问题分册). 1998(02)



本文编号：3696420