弓形虫GRA1基因真核表达载体的构建及其DNA与cDNA序列的比较

发布时间：2022-10-29 20:45

　　弓形虫是世界性分布的专性细胞内寄生原虫，可引起人兽共患的弓形虫病。成人弓形虫感染多呈无症状带虫状态，但先天感染可导致流产、畸胎或死胎，在免疫缺陷者（如器官移植、恶性肿瘤、应用免疫抑制剂者及AIDS患者等）常是致死的主要原因之一，此外弓形虫也可引起禽畜疾病，给畜牧业生产造成严重的经济损失。因此，弓形虫病的防治对人类健康、优生优育及畜牧业发展等具有重大意义。 乙胺嘧啶联合磺胺嘧啶可有效治疗弓形虫病，然而上述药物常引起严重的副反应，尤其在AIDS患者，常因此而中断治疗引起疾病复发，在孕期前16周感染弓形虫的孕妇因乙胺嘧啶潜在的致畸作用而禁用该类药物。因而，研制弓形虫疫苗已迫在眉睫。几十年来国内外学者在这方面进行了大量的基础性研究。经历了减毒活疫苗、亚单位疫苗后，出现了核酸疫苗。核酸疫苗是将某种保护性抗原的编码基因，克隆到真核细胞表达调控序列的质粒中，制成的DNA重组质粒直接接种宿主，宿主细胞摄取质粒后通过转录翻译，表达保护性抗原蛋白，从而诱导机体产生对该抗原的保护性免疫应答。与其他疫苗相比，核酸疫苗具有以下优点：1操作简单，只需接种质粒即可，其为体内真核表达，无须体外表达纯... 

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【学位级别】：硕士

【文章目录】：
前言
第一章 弓形虫病免疫学研究现状
    1 宿主感染后的免疫效应
        1.1 细胞免疫
        1.2 体液免疫
    2 免疫诊断
        2.1 检测抗体
        2.2 检测抗原
    3 疫苗的研制进展
        3.1 减毒活疫苗
        3.2 亚单位疫苗
        3.3 核酸疫苗
第二章 弓形虫GRA1基因真核表达载体的构建
    1 材料与方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2 结果
        2.1 GRA1基因的RT-PCR扩增
        2.2 pcDNA3-GRA1重组质粒的构建和鉴定
        2.3 序列分析
    3 讨论
        3.1 保护性抗原基因的选择
        3.2 真核表达系统的选择
        3.3 目的基因的扩增
    4 小结
第三章 弓形虫GRA1基因DNA序列及其与cDNA序列分析比较
    1 材料与方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2 结果
        2.1 GRA1基因PCR的扩增结果
        2.2 T-A克隆重组质粒的构建和鉴定
        2.3 GRA1基因DNA序列及其与cDNA序列
    3 讨论
        3.1 核基因mRNA内含子特点
        3.2 DNA与cDNA序列单碱基差异与RNA编辑
        3.3 实验方法的选择
    4 小结
结论
参考文献
中文摘要
英文摘要
附录
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]弓形虫侵入相关分子棒状体蛋白1基因重组质粒的克隆及其DNA免疫研究（英文）[J]. 陈观今,郭虹,吕芳丽,郑焕钦.  Chinese Medical Journal. 2001(08)
[2]Immunity induced by DNA vaccine of plasmid encoding the rhoptry protein 1 gene combined with the genetic adjuvant of pcIFN-γ against Toxoplasma gondii in mice[J]. 郭虹,陈观今,吕芳丽,陈海峰,郑焕钦.  Chinese Medical Journal. 2001(03)
[3]IL-6对IFNγ诱导的小鼠腹腔巨噬细胞抗弓形虫作用的影响[J]. 谭岩,方艳秋,杨贵贞,李淑红.  上海免疫学杂志. 1999(01)
[4]不同血清学方法诊断弓形虫病的比较[J]. 吕元聪，崔君兆，郑挺，谢丽群.  广西预防医学. 1995(05)
[5]免疫酶染色试验诊断弓形虫感染的初步研究[J]. 吕元聪，郑挺，崔君兆，谢丽群.  预防医学情报杂志. 1994(01)



本文编号：3698391