重组IL-4融合蛋白的构建、表达及纯化

发布时间：2022-11-04 18:29

　　IL-4是一种在免疫系统中发挥重要作用的具有多种功能的细胞因子，在人类IL-4主要由活化T细胞和肥大细胞产生，成熟人IL-4是分子量为18～19kDa的糖蛋白。IL-4可促使活化的B细胞分裂增殖，并增强B细胞抗原提呈的能力。IL-4是Ig重链基因类转换的主要调节因子，能促使B细胞表达和分泌IgE。IL-4也是CD4+T细胞的自分泌生长因子，促使Th0细胞向Th2细胞分化。此外，IL-4还可以调节造血干细胞的增殖和分化。由IL-4和粒单细胞集落刺激因子（GM-CSF）等多种细胞因子组成的培养体系可在体外诱导树突状细胞（DC）前体细胞——单核细胞，从而获得大量单核细胞来源的DC。DC作为人体内最有效的专职抗原提呈细胞,在人体的抗肿瘤免疫应答中发挥重要作用。因此，IL-4在抗肿瘤免疫治疗方面具有很大潜力，它作为肿瘤免疫调节剂已进入Ⅱ期临床试验。 凝血因子Xa是血液凝固所必须的一种糖蛋白。凝血因子Xa首先在氨基酸序列Ile-Glu-Gly-Arg中Arg后切割融合蛋白，因此，常被用来切割含有凝血因子Xa蛋白酶切位点的融合蛋白，以获得具有天然氨基酸序列的蛋白质。 ... 

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【学位级别】：硕士

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提要
英文缩写词表
前言
    1 IL-4的研究背景
        1.1 IL-4的产生、分子结构、基因及其受体
        1.2 IL-4的生物学活性
        1.3 IL-4的应用价值
    2 分子伴侣的研究现状
        2.1 分子伴侣的性质
        2.2 分子伴侣的分类
        2.3 分子伴侣的功能
        2.4 分子伴侣在基因重组技术中的应用
    3 固定化金属螯合亲和层析研究进展
        3.1 固定化金属螯合亲和层析的基本原理
        3.2 固定化金属螯合亲和层析在生命科学领域中的应用
材料与方法
    1 主要材料
        1.1 限制性内切酶及其它试剂
        1.2 质粒与菌株
        1.3 引物合成:由上海生物工程公司合成
        1.4 层析柱
        1.5 培养基
    2 主要方法
        2.1 采用PCR法扩增目的基因
        2.2 DNA片段的TA克隆
        2.3 相关质粒的构建
        2.4 重组IL-4融合蛋白的诱导表达
        2.5 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定表达产物
        2.6 Western印记鉴定表达产物
        2.7 用镍亲和层析的方法分别纯化两种重组融合蛋白
实验结果
    1 PCR法扩增目的基因及目的片段的TA克隆
        1.1 FIL-4与HisFIL-4基因的扩增及TA克隆
        1.2 HisCpn10基因的扩增及TA克隆
    2 重组质粒pET28a-FIL-4的构建
    3 重组质粒pET28a-HisCpn10与pET28a-Cpn10的构建
        3.1 重组质粒pET28a-HisCpn10的构建
        3.2 重组质粒pET28a-Cpn10的构建
    4 重组质粒ET28a-HisCpn10-FIL-4pET28a-Cpn10-HisFIL-4的构建
        4.1 重组质粒pET28a-HisCpn10-FIL-4的构建
        4.2 重组质粒pET28a-Cpn10-HisFIL-4的构建
    5 FIL-4、HisCpn10-FIL-4和Cpn10-HisFIL-4三种重组融合蛋白在大肠杆菌中的诱导表达及SDS-PAGE鉴定
    6 Western印记结果
    7 镍亲和层析纯化结果
图和照片
讨论
    1 重组IL-4融合蛋白在大肠杆菌中的诱导表达
    2 6×His tag在重组蛋白中的位置对镍亲和层析的影响
结 论
参 考 文 献
致 谢
攻读硕士学位期间已(待)发表的文章
中文摘要
ABSTRACT


【参考文献】：
期刊论文
[1]树突状细胞与免疫激活和免疫耐受[J]. 于益芝,曹雪涛.  第二军医大学学报. 2002(10)



本文编号：3701115