HIV-1 GAG基因片段的体外扩增、克隆和表达及表达产物的纯化和鉴定

发布时间：2022-11-11 22:34

　　艾滋病（AIDS）是本世纪末肆虐人类的一种严重传染病，已确定其病原为人免疫缺陷病毒（HIV）。对于艾滋病，目前尚无有效的治疗药物，因此，研究HIV疫苗对于AIDS的预防和治疗具有重要意义。HIV-1 gag P17／P18和P24／P25是具有潜力的HIV候选疫苗，英国政府批准进入人体试验的两种艾滋病疫苗，一个是P24-VLP，另一个是P17／P18蛋白上的一段多肽HGP30。本文应用体外扩增技术定向克隆和表达以HPG30序列为中心的一段包括大部分P18和小部分P25的多肽（P20蛋白），对于研制新的HIV疫苗具有一定的意义。 为开展HIV分子生物学研究工作，我们于88年从美国引入一株HIV-1病毒ARV-2的全基因组克隆。为便于工作，本文将ARV-2基因组 

【文章页数】：122 页

【学位级别】：博士

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前言
文献回顾
    Ⅰ．聚合酶链反应(PCR)及其应用
    Ⅱ．HIV复制调控研究进展
    Ⅲ．HIV疫苗研究概况
    参考文献
第一部分 HIV-I基因组DNA的亚克隆
    材料与方法
        一、实验材料
        二、实验方法
    结果
    讨论
    参考文献
第二部分 HIV-I gag基因片段的体外扩增和定向克隆
    材料与方法
        一、材料
        二、方法
    结果
        一、P20基因的体外扩增
        二、P20基因的克隆
        三、P20基因插入M13 mp18
        四、P20基因序列分析
    讨论
    参考文献
第三部分 P20基因在大肠杆菌中的表及其表达产物的纯化和鉴定
    材料与方法
        一、材料
        二、方法
    结果
        一、重组表达质粒的构建
        二、P20基因在大肠杆菌中的表达
        三、P20蛋白的抗原活性
        四、P20蛋白的纯化
    讨论
    参考文献
第四部分 应用PCR技术直接扩增HIV-1 gag基因序列的实验研究
    材料与方法
        一、材料
        二、方法
    结果
        一、PCR对HIV-1 gag靶基因片段的特异性扩增作用
        二、PCR方法检测HIV-1基因的敏感性
        三、循环次数对PCR产物的影响
        四、PCR定量检测HIV-1基因
    讨论
    参考文献
小结
致谢



本文编号：3705871